[发明专利]融合蛋白及其靶向PSCA的CAR及其应用

权利要求书

1.一种逆转肿瘤微环境的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为SIRPγ融合蛋白，所述SIRPγ融合蛋白结构包含胞外段、跨膜结构和胞内信号区，所述SIRPγ胞外段氨基酸序列如SEQ ID NO:5或其功能性变体所示；优选地，所述跨膜结构来源于人CD28跨膜区或人CD8来源跨膜区；优选地，所述跨膜结构氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示或其功能性变体；或如SEQ ID NO:4所示或其功能性变体。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述SIRPγ融合蛋白的结构为SIRPγ-CD28TM-CD28或SIRPγ-CD8TM-4-1BB；优选地，所述SIRPγ融合蛋白SIRPγ-CD28TM-CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示或其功能性变体；或所述SIRPγ融合蛋白SIRPγ-CD8TM-4-1BB的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示或其功能性变体。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，编码所述SIRPγ融合蛋白SIRPγ-CD28TM-CD28的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；或编码所述SIRPγ融合蛋白SIRPγ-CD8TM-4-1BB的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

4.包含权利要求1-3任一项所述的融合蛋白的表达载体。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、DNA载体，RNA载体中的任一种。

6.包含权利要求5所述的表达载体的免疫细胞。

7.根据权利要求6所述的免疫细胞，所述免疫细胞是T细胞、T细胞前体或NK细胞。

8.根据权利要求7所述的免疫细胞，其特征在于，包含具有识别肿瘤抗原的嵌合抗原受体结构，所述嵌合抗原受体包含识别肿瘤抗原的胞外段、hinge区、跨膜区和胞内信号区，所述肿瘤抗原为PSCA。

9.一种肿瘤免疫抑制抵抗型CAR，其特征在于，所述肿瘤免疫抑制抵抗型CAR包含权利要求1-3任一项所述的融合蛋白和CAR1，所述CAR1包含识别PSCA的胞外段、hinge区、跨膜区和胞内信号区。

10.根据权利要求9所述的肿瘤免疫抑制抵抗型CAR，其特征在于：所述CAR1包括PSCA单链抗体、铰链区、CD28跨膜区、CD28、CD137和CD3ξ三刺激信号；所述铰链区为G4H或7H；优选地，所述CAR结构a氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示或其功能性变体；或如SEQ ID NO：2所示或其功能性变体。

11.核酸序列，其特征在于，编码权利要求9或10所述的肿瘤免疫抑制抵抗型CAR，所述核酸序列包含如SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11所示的序列。

12.包含权利要求11所述核酸序列的重组质粒，其特征在于，所述质粒还包括表达载体，所述表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、DNA载体，RNA载体中的任一种。

13.一种制备如权利要求8所述的免疫细胞的方法，其特征在于，将不包含所述SIRPγ融合蛋白的CAR结构和所述SIRPγ融合蛋白共同表达于一个载体转染免疫细胞；或将不包含所述SIRPγ融合蛋白的CAR结构和所述SIRPγ融合蛋白分别表达于两个载体转染免疫细胞。

14.权利要求8所述的免疫细胞或权利要求9或10所述的肿瘤免疫抑制抵抗型CAR或权利要求11所述的核酸序列或权利要求12所述的重组质粒在制备肿瘤药物中的应用。