[发明专利]表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法

权利要求书

1.一种表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法，其特征在于，所述方法包括：

a)将包含宿主细胞蛋白的样品与乙酸萘酯反应；

b)样品与乙酸萘酯的反应产物与固蓝B盐进行显色反应；和

c)在550nm至600nm的波长处检测显色反应产物的吸光度；

样品与乙酸萘酯反应引起所述吸光度增加表明样品中存在宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯的降解活性。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述乙酸萘酯是α-乙酸萘酯，在600nm处检测所述吸光度；或者，所述乙酸萘酯是β-乙酸萘酯，在550nm处检测所述吸光度。

3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤a)中，乙酸萘酯包含于底物溶液中与所述样品反应，所述底物溶液包含0.01～0.2mol/L的磷酸氢二钠/磷酸二氢钠缓冲液，pH 6.0～8.0，0.5～3％(v/v)丙酮和0.00001～0.006mol/L乙酸萘酯。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述样品与乙酸萘酯的反应包括25～30℃孵育0.5～120小时；优选的，当样品为宿主细胞培养和收获后的中间产物时，孵育0.5～6小时；优选地，当样品为终产品时，孵育6～120小时。

5.如权利要求1所述的方法，其中，步骤b)中，固蓝B盐包含在显色液中，所述显色液还包含十二烷基硫酸钠；优选地，所述显色液为5％(w/v)十二烷基硫酸钠溶液与1％(w/v)固蓝B盐溶液按照10:1～1:1体积比的混合物。

6.如权利要求1所述的方法，其中，步骤b)中所述显色反应包括将显色反应系在4000～10000rpm转速下离心5～10分钟；然后取离心所得上清液如步骤c)所述检测所述吸光度。

7.如权利要求3所述的方法，其中，样品与底物溶液的体积比为1:1～1:10。

8.如权利要求5所述的方法，其中，显色液与步骤a)中样品的体积比为1:1。

9.如权利要求1所述的方法，其中，还包括由测得的吸光度确定样品中酯酶的酶活力、比活力和/或单位体积活力从而定量表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯的降解活性。

10.如权利要求1所述的方法，还具有一项或多项以下特征：

所述样品是宿主细胞培养和收获后的中间产物或是终产品；

所述宿主细胞为哺乳动物细胞，例如CHO细胞；

所述重组蛋白为抗体；和/或

所述聚山梨酯选自聚山梨酯80和聚山梨酯20。