[发明专利]表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法

说明书

在此公开了一种表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法，所述方法包括：a)将包含宿主细胞蛋白的样品与乙酸萘酯反应；b)样品与乙酸萘酯的反应产物与固蓝B盐进行显色反应；和c)检测显色反应产物在550nm至600nm处的吸光度；样品与乙酸萘酯反应引起吸光度增加表明样品中存在宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯的降解活性。本申请为表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性提供了一种方便快捷，成本低，灵敏度高的方法。

技术领域

本申请属于生物医药技术领域，具体涉及一种表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的可定量的方法。

背景技术

生物医药技术是当今医药工艺发展的核心力量。以单克隆抗体类药物为典型代表的生物制品是治疗恶性肿瘤、自身免疫病以及阿尔兹海默等疾病的重要药物种类。

聚山梨酯例如聚山梨酯20和80是生物制药中最常用的表面活性剂，它们可以改善蛋白质制剂药品的稳定性并在蛋白质制剂药品的长期储存和运输过程中防止蛋白质产生聚集和变性，从而阻止蛋白质制剂药品质量的下降。然而聚山梨酯在一定条件下容易发生水解，则会造成蛋白质发生聚集，引起药品质量的下降。聚山梨酯的水解机理已经被行业广泛的研究，除了酸和碱的诱导水解外，宿主细胞蛋白(HCP)与目标蛋白质共同纯化，并最终残留在蛋白质制剂药品中，是最主要的造成聚山梨酯水解的原因。由于在蛋白质制剂药品的早期开发过程中，用于检测HCP的手段匮乏，造成在蛋白质制剂开发过程中不得不忽略掉HCP对聚山梨酯降解情况影响的研究，结果在蛋白质制剂药品的长期储存和运输过程中，容易引起蛋白质的聚集和变性，在后期的调查和研究中耗费更多的资源用于解决药品质量下降的问题。基于上述的原因，亟需一种能够在蛋白质制剂药品开发的早期方便、快捷、高灵敏度检测HCP中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法。

发明内容

为解决上述现有技术中的问题满足现有技术中的需求，本发明提供了一种表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法，所述方法可定量。具体地说，本发明提供了一种表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯降解活性的方法，其特征在于，所述方法包括：

a)将包含宿主细胞蛋白的样品与乙酸萘酯反应；

b)样品与乙酸萘酯的反应产物与固蓝B盐进行显色反应；和

c)在550nm至600nm的波长处检测显色反应产物的吸光度；

样品与乙酸萘酯反应引起所述吸光度增加表明样品中存在宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯的降解活性。

其中，所述样品可以是宿主细胞培养和收获后各工段、各节点采集的中间产物，也可以是最终纯化后的终产品。本发明方法还能够确定样品中酯酶的酶活力，比活力和/或单位体积活力从而定量表征宿主细胞蛋白中酯酶对聚山梨酯的降解活性。

本发明的方法能够定量分析中间产物是否存在会降解聚山梨酯的酯酶活性。本发明的方法能够用于下游纯化工艺开发中，通过定量酯酶活性随着下游工艺的优化而发生的下降，指导纯化工艺尤其是去除宿主细胞蛋白中酯酶的工艺开发。本发明的方法能够用于对终产品例如原液或成品中残留酯酶的活性进行定量，指导评估聚山梨酯因HCP降解的风险。

附图说明

图1：实施例之一中，萘酚含量与吸光度的标准曲线。其中，横坐标是测得的吸光度，纵坐标是萘酚含量。

图2：实施例之一中，聚山梨酯80竞争性抑制酯酶对乙酸萘酯降解活性的米氏方程双倒数图。其中，横坐标为1/[S]，纵坐标是1/v。

具体实施方式

本文中，除非特别指定，名称、量词或单位前的“一”或“1”表示存在即数量上至少为一，因此涵盖复数含义。

本文中，除非特别指定，本文述及的各项技术特征，例如组分、含量、步骤、条件参数、参数值、组件、连接关系、工作关系等等，它们的组合方式不限于本文具体描述的各个实施方式和实施例，其他任意组合方式同样属于本发明的范畴。