[发明专利]一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法

权利要求书

1. 一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，其特征在于：具体步骤为：

1）确定猪成纤维细胞基因型鉴定所需的最低细胞量

针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系，进行PCR、酶切及测序鉴定，基于细胞PCR条带灰度值、酶切结果和测序结果，筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量为50个细胞；

2）转基因阳性猪成纤维细胞系的筛选

将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选，当单克隆细胞系形成时，抠取后于培养板扩大培养并取细胞基因型鉴定所需的最低细胞量对不同克隆点细胞系进行基因型鉴定；

将鉴定为阳性的单克隆细胞系作为供体细胞立即进行体细胞核移植和胚胎移植，待代孕母猪妊娠后取出胎儿鉴定目的基因的编辑情况，分离培养后获得转基因猪胎儿阳性细胞系。

2.根据权利要求1所述的一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，其特征在于：步骤2）中，猪体细胞核移植的供体细胞来自于96孔板中培养的且经计数50个细胞鉴定后为阳性的单克隆细胞系；代孕母猪头数为3头，需适时B超监测妊娠情况，妊娠时取出胎儿并鉴定胎儿基因编辑情况，经鉴定为阳性的胎儿可进行分离培养获得大量的基因编辑猪阳性胎儿成纤维细胞系，能够完全满足于后续体细胞核移植基因编辑猪纯合的胎儿成纤维细胞的需求。