[发明专利]一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法有效
| 申请号： | 202110561197.6 | 申请日： | 2021-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN113186147B | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 赵鑫锐;张博涵;王紫微;周景文;堵国成;李江华;陈坚;钱源 | 申请（专利权）人： | 江南大学;江苏东汇生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/38 | 分类号： | C12N1/38;C12N1/16;C12P21/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 酵母 工程 生产 肌红蛋白 发酵 方法 | ||
1.一种提高重组毕赤酵母产猪肌红蛋白的发酵方法，其特征在于，将重组毕赤酵母在含有血红素的体系中发酵，所述重组毕赤酵母表达了NCBI Reference Sequence为NP_999401.1的猪肌红蛋白；所述毕赤酵母以Pichia pastoris X33为宿主，以GAP启动子或G1启动子对所述猪肌红蛋白进行表达；所述体系以甘油或葡萄糖为碳源，含有20～40mg/L的血红素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述G1启动子的序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将OD600＝8～10的所述重组毕赤酵母加入摇瓶或发酵罐中发酵生产猪肌红蛋白；发酵体系中含有20～40mg/L的血红素。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在摇瓶发酵时，发酵条件为：在25～35℃，pH＝4.0～7.0，150～300rpm发酵至少60h。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在发酵罐发酵时，发酵条件为：在25～35℃，通气量为1.0～2.0VVM，pH＝4.0～7.0，DO控制在20％～30％发酵至少70h。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当DO不低于30％，向发酵体系中添加50～150mg/L的血红素。
7.根据权利要求3～6任一项所述方法，其特征在于，发酵体系中含有10～30g蛋白胨、5～15g甘油、5～15g酵母提取物和1×10-4～5×10-4g生物素。
8.权利要求1～7任一项所述方法在生产猪肌红蛋白或其衍生产品方面的应用。
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