[发明专利]一种肝细胞冻存液及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种肝细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液包括：体积分数5％～10％的二甲基亚砜，体积分数为10～15％的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，0.5～2.0g/L的葡萄糖，35～50g/L的人重组白蛋白，30～120μmol/L的维生素C，10～50μmol/L的维生素E，以及余量的混合溶液，所述混合溶液中细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比1:1～2；

所述细胞缓冲液的组分为：6800～8000mg/L NaCl、300～400g/L KCl、140～200mg/LCaCl₂、95～100mg/L无水MgSO₂、100～130mg/L Na₂HPO₄、40～55mg/L KH₂PO₄以及余量无菌水，所述细胞缓冲液的pH为7.1～7.6且其渗透压为250～290mOsm/L；

所述氨基酸混合液中含有：5～7.5mg/L甘氨酸、7～9mg/L L-丙氨酸、40～50mg/L L-缬氨酸、45～55mg/L L-亮氨酸、45～55mg/L L-异亮氨酸、25～35mg/L L-苯丙氨酸、8～13mg/L L-脯氨酸、8～13mg/L L-色氨酸、8～13mg/L L-丝氨酸、30～40mg/L L-络氨酸、12～20mg/L L-蛋氨酸、280～300mg/L L-谷氨酰胺、25～35mg/L L-胱氨酸、12～15mg/L L-天冬酰胺、120～130mg/L L-精氨酸、70～75mg/L L-赖氨酸、40～45mg/L L-组氨酸、12～15mg/LL-天门冬氨酸、13～15mg/L L-谷氨酸、0.5～1.8g/L亚硫酸氢钠、11～15g/L山梨醇，所述氨基酸混合液的溶剂为无菌水。

2.一种制备权利要求1所述肝细胞冻存液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将细胞缓冲液中的各组分原料溶于无菌水中，搅拌混匀，调节pH至7.1～7.6，灭菌得到细胞缓冲液；

S2、取各类氨基酸和亚硫酸氢钠溶于含有山梨醇的无菌水溶液中，搅拌均匀即得氨基酸混合液；

S3、将步骤S1所述细胞缓冲液与步骤S2所述氨基酸混合液按比例混合，搅拌均匀后，加入葡萄糖、人重组白蛋白、维生素C、维生素E、羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，搅拌混匀后使其渗透压为250～290mOsm/L，除菌，再与二甲基亚砜混合即得肝细胞冻存液。

3.权利要求1所述肝细胞冻存液在冻存肝细胞中的应用，其特征在于，所述每1mL冻存液中保存的肝细胞数量为1～1.5×10⁷个。