[发明专利]一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法

权利要求书

1.一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将虎奶菇菌核磨粉，获得菌核粉末；

(2)将步骤(1)获得的菌核粉末加入到PBS溶液中，搅拌提取，除去滤液，再以去离子水洗涤滤渣，获得细胞壁碎片；菌核粉末和PBS溶液的料液比为1g：(10～20)mL；

(3)向步骤(2)获得的细胞壁碎片中加入去垢剂-还原剂混合溶液反复浸提，浸提结束后合并所得浸提液，滤去残渣，得到细胞壁糖蛋白粗提液；去垢剂-还原剂混合溶液由pH7.5～8.5的45～55mM Tris-HCl，0.08～0.12M乙二胺四乙酸，1% ～5％十二烷基硫酸钠和5～15mM二硫苏糖醇配制而成；细胞壁碎片与去垢剂-还原剂混合溶液的料液比为1g：(5～10)mL；

(4)向步骤(3)获得的粗提液中加入三氯乙酸孵育并离心得到沉淀，丙酮洗涤沉淀，离心弃上清，使丙酮完全挥发，得到糖蛋白粗提物粉末；三氯乙酸的终浓度为8% ～12％，丙酮的添加量为沉淀的1～3倍体积；

(5)用水溶解步骤(4)中的糖蛋白粗提物粉末并进行透析，将透析袋中截留的液体冷冻干燥，即得虎奶菇菌核细胞壁糖蛋白；透析袋的截流量为7800～8200Da。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，将干燥的虎奶菇菌核磨粉、过50～100目筛，获得虎奶菇菌核粉末；或取新鲜的虎奶菇菌核冷冻后研磨，获得虎奶菇菌核粉末。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，洗涤滤渣的次数不少于8次。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，浸提所用温度为80～100℃，浸提时间为10～30min，浸提过程重复3～5次。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，离心的条件为在2～6℃下5500～6500g离心8～12min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，透析至透析袋外液体导电率接近去离子水后将透析袋中截留的液体进行冷冻干燥。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)得到的虎奶菇菌核细胞壁糖蛋白经柱分离纯化，得到不同分子量的糖蛋白。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，柱分离为依次经DEAE阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱。

9.权利要求1～8任一所述方法提取得到的虎奶菇菌核细胞壁糖蛋白在食品领域中的应用。