[发明专利]一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法

说明书

本发明公开了一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法，属于生物技术领域。本发明通过将干燥的或新鲜的虎奶菇菌核粉碎、PBS清洗、去垢剂‑还原剂混合溶液浸提、三氯乙酸沉淀、丙酮清洗、透析得到虎奶菇菌核细胞壁糖蛋白，所得糖蛋白占菌核细胞壁干重的4.93～5.36％，糖蛋白中总糖含量约为32％，总蛋白含量约为67％，无游离多糖和大分子蛋白质的残留。再经过柱分离可以得到不同分子量大小的糖蛋白纯品。本发明所采用的方法工艺简单，操作性强，易于实现，纯度较高，具有广阔的工业应用前景。

技术领域

本发明涉及一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法，属于生物技术领域。

背景技术

糖蛋白(Glycoprotein)是带分支的寡糖链与蛋白质共价相连所构成的复合糖，在自然界中广泛存在，具有抗癌、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种功能和活性，其结构和功能的特殊性使之日益受到关注。

食用菌作为一种来源广泛、价格低廉、安全无害的大型真菌，栽培技术比较成熟，在糖蛋白资源的开发方面有着巨大的潜力。但对食用菌中糖蛋白进行高效的提取分离存在一定困难，现普遍采用的纯化蛋白质的方法，产物纯度较低。因此，研发一种更简便的食用菌糖蛋白提取方法对糖蛋白的功能和价值的开发具有极大的推动作用。

虎奶菇(Pleurotus tuber-regium,PTR)是一类食药两用真菌，研究表明，虎奶菇具有增强机体免疫力、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂等多种生理功能，不仅是一种非常理想的营养健康食品，还是开发天然药物资源的新领域。目前，对虎奶菇多糖、蛋白、氨基酸、凝集素等已有较充分的研究，但对其糖蛋白的研究却鲜有涉及。

发明内容

[技术问题]

提取分离食用菌中糖蛋白普遍采用的纯化蛋白质的方法，得到产物纯度较低。

[技术方案]

本发明的目的在于提供一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法。

本发明所述方法包括以下步骤：

(1)将虎奶菇菌核磨粉，获得菌核粉末；

(2)将步骤(1)中菌核粉末加入到PBS溶液中，搅拌提取，除去滤液，再以去离子水洗涤滤渣，获得虎奶菇菌核细胞壁碎片；

(3)向步骤(2)获得的细胞壁碎片中加入去垢剂-还原剂混合溶液(DRAS)反复浸提，浸提结束后合并所得浸提液，滤去残渣，得到细胞壁糖蛋白粗提液；

(4)向步骤(3)中粗提液中加入三氯乙酸(TCA)孵育并离心得到沉淀，丙酮洗涤沉淀，离心弃上清液，使丙酮完全挥发，得到糖蛋白粗提物粉末；

(5)用水溶解步骤(4)中糖蛋白粗提物粉末并进行透析，将透析袋中截留的液体冷冻干燥，即得虎奶菇菌核细胞壁糖蛋白；

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中，采用干燥的虎奶菇菌核粉碎后，过50～100目筛，获得虎奶菇干菌核粉末。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中，采用新鲜的虎奶菇菌核，液氮冷冻后研磨，获得虎奶菇鲜菌核粉末。

在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，菌核粉末与PBS溶液的料液比为1g：(10～20)mL。

在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，以真空度0.05～0.1MPa抽滤除去滤液，并用去离子水洗涤滤渣，洗涤滤渣的次数不少于8次。

在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，DRAS由pH 7.5～8.5的45～55mM Tris-HCl，0.08～0.12M乙二胺四乙酸(EDTA)，1～5％(w/v)十二烷基硫酸钠(SDS)和5～15mM二硫苏糖醇(DTT)配制而成。