[发明专利]一种应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物及其应用在审
| 申请号： | 202110564426.X | 申请日： | 2021-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN113122615A | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 朱方何;袁光孝;林东旭;周怡;任胜强;陈杰 | 申请（专利权）人： | 广州赛哲生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国际生物岛螺旋四路一号研发A区第*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 应用于 绝对 定量 通量 多重 pcr 扩增 分子 标签 引物 及其 应用 | ||
1.一种应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物，其特征在于，所述单分子标签引物包括：5’端修饰基团、核苷酸片段和3’端修饰基团；
所述5’端修饰基团包括UMI分子标签和通用引物接头，其中，所述UMI分子标签与核苷酸片段的5’端相连，所述通用引物接头与UMI分子标签5’端相连；
所述核苷酸序列与目标序列匹配，用于扩增所述目标序列；
所述3’端修饰基团包括RNA残基、DNA保护碱基和封闭基团，其中，所述RNA残基与核苷酸片段的3’端相连，所述DNA保护碱基与RNA残基相连，所述封闭基团与DNA保护碱基相连。
2.根据权利要求1所述的应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物，其特征在于，所述UMI分子标签包括随机碱基；
优选地，所述随机碱基的数量为2～15个，优选为10个；
优选地，所述通用引物接头包括所述目标序列非同源序列的通用引物，优选为测序平台测序引物的部分或全部序列；
优选地，所述通用引物的长度为10～30bp，优选为15～25bp。
3.根据权利要求1或2所述的应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物，其特征在于，所述RNA残基的数量为1～10个；
优选地，所述RNA残基包括A、U、G或C中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述DNA保护碱基的数量为不少于1；
优选地，所述DNA保护碱基包括A、T、G或C中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述封闭基团包括C3间隔、C5间隔、C6间隔、双脱氧胞苷、氨基或碱基倒置中的任意一种或至少两种的组合。
4.一种权利要求1～3任一项所述的应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
合成核苷酸片段序列，将UMI分子标签和通用引物接头按顺序依次连接到所述核苷酸片段序列的5’端，再将RNA残基、DNA保护碱基和封闭基团按顺序依次连接到所述核苷酸片段序列的3’端，得到所述应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物。
5.一种应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的配套试剂，其特征在于，所述配套试剂包括权利要求1～3任一项所述的应用于绝对定量高通量测序的多重PCR扩增的单分子标签引物；
优选地，所述配套试剂还包括扩增反应体系；
优选地，所述扩增反应体系包括酶和缓冲液。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广州赛哲生物科技股份有限公司，未经广州赛哲生物科技股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110564426.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
