[发明专利]测序方法

权利要求书

1.一种测序方法，其特征在于，包括：

提供表面连接有多个单链核酸的固相基底，所述单链核酸的5'末端与所述表面连接，所述单链核酸为包含插入片段-第一序列的多核苷酸，所述插入片段为来自待测样本的核酸序列，所述第一序列为包含标签-第一位点的预设序列，所述标签为特异性对应所述待测样本的预设序列；

提供第一测序引物，所述第一测序引物能够与所述第一位点的5'末端杂交；以及

使所述第一测序引物与所述单链核酸杂交并置于适于进行聚合测序的条件下，以通过延伸所述第一测序引物对所述单链核酸的一部分序列进行测定，获得测序结果。

2.权利要求1的方法，其特征在于，所述测序结果据包括读段，所述读段包含所述标签和至少一部分所述插入片段的序列信息；

任选地，所述读段的长度不小于所述标签的长度的四倍。

3.权利要求1的方法，其特征在于，所述第一序列为包含第二位点-标签-第一位点的预设序列，所述方法还包括：

提供第二测序引物，所述第二测序引物能够与所述第二位点的5'末端杂交；

使所述第二测序引物与所述单链核酸杂交并置于适于进行聚合测序的条件下，以通过延伸所述第二测序引物对所述单链核酸上的插入片段的至少一部分序列进行测定，获得所述测序结果；

任选地，所述测序结果包括第一读段和第二读段，所述第一读段包含所述标签的序列信息，所述第二读段包含至少一部分所述插入片段的序列信息。

4.权利要求3的方法，其特征在于，所述单链核酸为包含第二序列-插入片段-第一序列的多核苷酸，所述第二序列为包含第三位点的预设序列；

任选地，所述单链核酸通过所述第二序列的5'末端共价连接于固相基底的表面。

5.权利要求4的方法，其特征在于，所述标签为第一标签，所述第二序列为包含第二标签-第三位点的预设序列或者为包含第四位点-第二标签-第三位点的预设序列，所述第二标签为特异性对应所述待测样本的预设序列；

任选地，还包括：

提供第三测序引物，所述第三测序引物能够与所述第三位点的5'末端杂交；以及

使所述第三测序引物与所述单链核酸杂交并置于适于进行聚合测序的条件下，以通过延伸所述第三测序引物对所述单链核酸上的第二标签的序列进行测定，获得所述测序结果；

任选地，所述测序结果还包括第三读段，所述第三读段包含所述第二标签的序列信息。

6.权利要求5的方法，其特征在于，所述单链核酸为第一单链核酸，所述表面还连接有第二单链核酸，所述第二单链核酸为所述第一单链核酸的互补链，所述第二单链核酸通过其上的与所述第一序列互补的部分的5'末端与所述表面连接；

任选地，其特征在于，还包括：

提供第四测序引物，所述第四测序引物能够与所述第二单链核酸上的与所述第三位点互补的部分的5'末端杂交；以及

使所述第四测序引物与所述第二单链核酸杂交并置于适于进行聚合测序的条件下，以通过延伸所述第四测序引物对所述单链核酸上的插入片段的至少一部分序列进行测定，获得所述测序结果。

7.权利要求5的方法，其特征在于，所述单链核酸为第一单链核酸，所述表面还连接有第二单链核酸，所述第二单链核酸为所述第一单链核酸的互补链，所述第二单链核酸通过其上的与第一序列互补的部分的5'末端与所述表面连接，所述第二序列为包含第四位点-第二标签-第三位点的预设序列，所述方法还包括：

提供第三测序引物，所述第三测序引物能够与所述第二单链核酸上的与第三位点互补的部分的5'末端杂交；

提供第四测序引物，所述第四测序引物能够与所述第二单链核酸上的与第四位点互补的部分的5'末端杂交；

使所述第三测序引物与所述第二单链核酸杂交并置于适于进行聚合测序的条件下，以通过延伸所述第三测序引物对所述单链核酸上的插入片段的至少一部分序列进行测定；以及

使所述第四测序引物与所述第二单链核酸杂交并置于适于进行聚合测序的条件下，以通过延伸所述第四测序引物对所述单链核酸上的第二标签的序列进行测定，获得所述测序结果。