[发明专利]精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，包括：R1、R2和R3试剂；其特征在于，

所述R1试剂为链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒；

所述R2试剂为化学发光标记物标记的精子顶体酶抗体；

所述R3试剂为偶联标记物标记的精子顶体酶抗体。

2.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的质量比是0.02％～1％。

3.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，精子顶体酶抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～20；缓冲液为100～500mMBistris，0.3～1.0M锌化合物，精子顶体酶抗体终浓度为0.1～1μg/mL。

4.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R3试剂中，精子顶体酶抗体与偶联标记物的标记比例是1:5～20；缓冲液为100～500mMBistris，0.3～1.0M锌化合物，精子顶体酶抗体终浓度为0.2～3μg/mL。

5.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，磁颗粒的粒径是4～6μm。

6.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或者三联吡啶钌。

7.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R3试剂中，偶联标记物为生物素或者抗原。

8.根据权利要求3或4所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述锌化合物为硫酸锌、氯化锌或者硫代硫酸锌。

9.根据权利要求1所述的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括精子顶体酶校准品，所述精子顶体酶校准品浓度为0.0pg/mL、2.0pg/mL、5.0pg/mL、10.0pg/mL、20.0pg/mL、50.0pg/mL和100.0pg/mL的精子顶体酶蛋白溶液。

10.一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、R1试剂的制备

取浓度是100mg/mL的链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒溶液0.5毫升(50mg)，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒；重复清洗3次后在100～500mMBistris，pH6～8的缓冲液中配成磁珠浓度为0.072％的R1试剂；

步骤2、R2试剂的制备

将500μg精子顶体酶抗体放入离心管中，保证抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后按照精子顶体酶抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～20加入化学发光标记物的DMF溶液，经过封闭、纯化步骤后得到精子顶体酶化学发光标记物抗体；将精子顶体酶化学发光标记物抗体浓溶液用100～500mM Bistris、0.3～1.0M锌化合物，pH6～8的缓冲液配制成抗体终浓度为0.1-2μg/mL的R2试剂；

步骤3、R3试剂的制备

取500μg精子顶体酶抗体，将pH6.5的TRIS缓冲液透析纯化后，按照精子顶体酶抗体与偶联标记物的标记比例是1:5～20加入偶联标记物，经过封闭、纯化步骤后得到偶联标记物标记的精子顶体酶抗体；将偶联标记物标记的精子顶体酶抗体浓溶液用100～500mMBistris、0.3～1.0M锌化合物，pH6～8的缓冲液配制成抗体终浓度为0.2-3μg/mL的R3试剂；

将R1、R2和R3试剂组装成成品试剂即精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒。