[发明专利]无细胞脂肪提取物及其制备方法、分析方法

说明书

本发明涉及一种无细胞脂肪提取物及其制备方法、分析方法，其中，制备方法包括：步骤一、将去除血细胞和其他杂质的脂肪抽吸物离心分层后，取中间脂肪层得到脂肪细胞液；步骤二、将所述脂肪细胞液进行机械乳化后，通过冻融或震荡的方式将脂肪细胞完全破碎；步骤三、将破碎后的脂肪细胞液离心分层后，取第三层得到提取物混合液；步骤四、对提取物混合液进行过滤处理以最终得到无细胞脂肪提取物；步骤五、将无细胞脂肪提取物注液使用或者冻存。本发明的无细胞脂肪提取物中包含多种细胞因子，在脂肪填充时，将颗粒脂肪与无细胞脂肪提取物按比例混合移植可以提高脂肪移植成活率，减少回填脂肪坏死、溶解、吸收、纤维化、钙化、囊肿结节等问题。

技术领域

本发明涉及细胞工程技术领域，特别涉及一种无细胞脂肪提取物及其制备方法、分析方法。

背景技术

脂肪抽吸术所得脂肪的再次利用，根据不同技术手段可以从脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells，ADSCs)、颗粒脂肪、纳米脂肪(nanofat)、基质血管成分(Stromal Vascular Fraction， SVF)。

脂肪间充质干细胞培养可收获脂肪间充质干细胞上清液，其中脂肪间充质干细胞、基质血管成分细胞、脂肪间充质干细胞上清液可通过注射回输方式治疗缺血性疾病、骨关节退行性疾病、代谢性疾病、毛发再生等，也能在抗皱纹、瘢痕治疗、皮肤再生、皮肤年轻化、脂肪移植等医美领域发挥作用。源自外周血的富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)在上述方面也有类似作用，其含有多种生长因子，如TGF-珀.PDGF、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子等。

但上述脂肪组织提取物及衍生物和PRP在质量控制、安全性、技术保存、疗效、反复注射方面均有不同程度问题。脂肪间充质干细胞(ADSCs) 是一种由脂肪组织经历多次消化分离的干细胞，在培养时需要消化酶和培养基等外源性物质，有致瘤、栓塞的风险，再次利用前需要二甲基亚砜等冻存保护液冷冻保存。SVF的制备是由脂肪组织经胶原酶震荡消化离心获得沉淀物，沉淀物再离心获得的混合产物，需要经胶原酶消化离心等步骤，含有大量除脂肪干细胞外的其他细胞和细胞因子构成微环境，也有栓塞风险，保存需要保护剂。ADSCs/SVF在异体移植注射时均有排斥风险，需要采用自体脂肪制备避免，再次注射时需要复苏，或者再次抽取脂肪制备，步骤繁琐。ADSCs上清液,因为源自ADSCs，因此避免不了接触酶和化学物质，在保存时需要和使用后的培养液共同保存，细胞因子浓度被培养液稀释，浓度降低。PRP是外周血经体外离心、分离，获取的一种富含血小板的血浆，其主要物质为血小板、白细胞及纤粘蛋白，具有细胞安全问题，不可保存，制备完成后即需使用。

以上现有技术在治疗缺血性疾病、骨关节退行性疾病、代谢性疾病、毛发再生、抗皱纹、瘢痕治疗、皮肤再生、皮肤年轻化、脂肪移植各方面均有不同程度问题，且无法通过现有技术解决。因此，业界对于能够发挥以上治疗作用且对于人体安全无刺激性的组成物，仍存在有殷切的需求。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种无细胞脂肪提取物及其制备方法、分析方法，具有制备过程简便且安全性高的优点。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种无细胞脂肪提取物的制备方法，包括：

步骤一、将去除血细胞和其他杂质的脂肪抽吸物离心分层后，取中间脂肪层得到脂肪细胞液；

步骤二、将所述脂肪细胞液进行机械乳化后，通过冻融或震荡的方式将脂肪细胞完全破碎；

步骤三、将破碎后的脂肪细胞液离心分层后，取第三层得到提取物混合液；

步骤四、对提取物混合液进行过滤处理以最终得到无细胞脂肪提取物；

步骤五、将无细胞脂肪提取物注液使用或者冻存。