[发明专利]检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述交叉引物等温扩增引物组由外围置换引物ArBF2、外围置换引物ArBR2、扩增引物ArDR2、扩增引物ArMBR2、交叉引物ArCPF2组成；

所述外围置换引物ArBF2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述外围置换引物ArBR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述扩增引物ArDR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述扩增引物ArMBR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述交叉引物ArCPF2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.如权利要求1所述的检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述扩增引物ArDR2的5’端有6-羧基荧光素标记，扩增引物ArMBR2的5’端有生物素荧光基团标记。

3.如权利要求1所述的检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述外围置换引物ArBF2、外围置换引物ArBR2、扩增引物ArDR2、扩增引物ArMBR2和交叉引物ArCPF2的摩尔比为：1：1：3：3：5。

4.一种检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增试剂，其特征在于，包括权利1-3任一项所述的交叉引物等温扩增引物组；

所述外围置换引物ArBF2和所述外围置换引物ArBR2在所述扩增试剂中的终浓度均为0.2μmol/L；

所述扩增引物ArDR2和扩增引物ArMBR2在所述扩增试剂中的终浓度均为0.6μmol/L；

所述交叉引物ArCPF2在所述扩增试剂中的终浓度均为1μmol/L。

5.一种检测菜豆荚斑斑驳病毒的交叉引物等温扩增试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的引物组或权利要求4所述的扩增试剂。

6.权利要求1-3任一项所述的引物组或权利要求4所述的扩增试剂或权利要求5所述的试剂盒在检测待检测样品是否感染南芥菜花叶病毒中的应用。

7.一种检测待测样品是否感染南芥菜花叶病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：

采用权利要求1-3任一项所述的引物组或权利要求4所述的扩增试剂或权利要求5所述的试剂盒对待测样品进行交叉引物等温扩增，

利用荧光染料和实时荧光仪器进行实时监测，观察荧光曲线；

若未出现扩增曲线，则待测样品没有南芥菜花叶病毒侵染；

若出现扩增曲线，则待测样品为南芥菜花叶病毒感染。

8.一种检测待测样品是否感染南芥菜花叶病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：

采用权利要求1-3任一项所述的引物组或权利要求4所述的扩增试剂或权利要求5所述的试剂盒对待测样品进行交叉引物等温扩增，得到扩增产物；

用荧光标记核酸试纸条检测试剂盒扩增产物，2-5min后观察试纸条；

若质控线出现一条蓝色条带，检测限内无条带出现，则待测样品没有被南芥菜花叶病毒侵染；

若质控线出现一条蓝色或红色条带，检测线出现一条红色条带，则待测样品为南芥菜花叶病毒感染。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述交叉引物等温扩增反应条件为60℃，反应时间为90min。

10.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述交叉引物等温扩增的模板为RNA。