[发明专利]鸡白痢沙门氏菌和鸡滑液囊支原体双重平板凝集抗原及其制备方法和应用

权利要求书

1.鸡白痢沙门氏菌和鸡滑液囊支原体双重平板凝集抗原，其特征在于：由鸡白痢沙门氏菌C79-1和鸡滑液囊支原体GX11-T制成，所述鸡白痢沙门氏菌C79-1和鸡滑液囊支原体GX11-T均在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号分别为CVCC 79207、CVCC2960；所述鸡白痢沙门氏菌C79-1和鸡滑液囊支原体GX11-T的菌液体积比为2：3；所述鸡白痢沙门氏菌C79-1的菌液浓度为1.0×10¹⁰CFU/mL；所述鸡滑液囊支原体GX11-T的菌液浓度为1.0×10¹¹ccu/mL。

2.权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌和鸡滑液囊支原体双重平板凝集抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)制备鸡白痢沙门氏菌C79-1抗原；

b)制备鸡滑液囊支原体GX11-T抗原；

c)将步骤a)中制备的鸡白痢沙门氏菌C79-1抗原和步骤b)中制备的鸡滑液囊支原体抗原按2:3体积配比，加入染色剂，加入保护剂，均质分装保存。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤a)制备鸡白痢沙门氏菌C79-1抗原的方法为：

(1)将鸡白痢沙门氏菌C79-1菌种经复苏繁殖获得种子菌液；

(2)种子菌液扩大培养并灭活；

(3)灭活菌液加入2倍量的体积分数为95％乙醇，沉淀，离心弃上清，沉淀物重悬。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤a)制备鸡白痢沙门氏菌C79-1抗原的方法具体为：

(1)种子菌液的制备：将鸡白痢沙门氏菌C79-1菌种经TSB液体培养基复苏繁殖后，接种TSA固体平板培养基，37℃培养20h后用马丁液体培养基洗下菌苔，扩大培养后，再按5.0％体积比例接种含有马丁肉汤培养基的发酵罐中发酵培养；所述固体平板培养基通过液体培养基中加入1.5％的纯化琼脂粉制成；

(2)细菌培养：经37℃高密度发酵培养18h后，收获菌液，活菌计数，按加入甲醛至终浓度为体积分数0.3％，37℃灭活24h；

(3)抗原制备：灭活菌液中加入2倍量的体积分数为95％乙醇，沉淀3d，弃去部分上清，剩余部分8 000r/min离心10min弃去上清，沉淀物用体积分数为1％甲醛生理盐水重悬，调整菌液浓度为1.0×10¹⁰CFU/mL。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤b)中制备鸡滑液囊支原体GX11-T抗原的方法为：

(1)将鸡滑液囊支原体GX11-T菌种经复苏繁殖获得种子菌液；

(2)种子菌液连续增菌扩大培养后灭活；

(3)灭活菌液离心，重悬。