[发明专利]一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法及其应用

权利要求书

1.一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）以百合鳞茎或珠芽为材料，进行常规表面消毒处理后，将其置于初代培养基上培养2~3周，获得百合无菌小芽材料，再以所述百合无菌小芽为外植体，在继代培养基中培养3~4周，获得大量正常生长的无菌小鳞茎；

2）将步骤1）得到的无菌小鳞茎置于37℃预处理12h，然后置于23~25℃常温条件下处理12h，变温处理重复3~5次；

3）将步骤2）热处理后的材料置于95℃条件下处理7min，然后剥取长度为1~2mm的鳞片叶尖接种到芽分化培养基上培养2~3周，诱导产生丛生芽，再将所述丛生芽接种到增殖培养基中1~2周，诱导产生更多的不定芽，然后接种在生根培养基上培养1~2周获得生根幼苗，即得到百合脱毒苗；

4）取步骤3）脱毒苗的鳞片接种到不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导培养产生不定芽，再将所述不定芽接种于继代增殖培养基上进行继代增殖培养获得增殖苗，然后将所述增殖苗转移到生根培养基上进行生根培养获得生根幼苗，即得到大量脱毒组培苗。

2.根据权利要求1所述基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，其特征在于，所述消毒是先用洗衣粉溶液浸泡5~15min，并在流水下冲洗1~2h，再将其放置于无菌操作台放入无菌容器中，然后用体积分数为75％的乙醇浸泡40s，再用质量浓度为0.1% 升汞溶液处理15min，最后用无菌水冲洗6~8次。

3.根据权利要求1所述基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L，培养基pH值为5.6-6.0。

4.根据权利要求1所述基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，其特征在于，所述继代增殖培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L，培养基pH值为5.6-6.0。

5.根据权利要求1所述基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，其特征在于，所述生根培养基为MS+NAA 1mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L，培养基pH值为5.6-6.0。

6.根据权利要求1所述百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养、继代增殖培养和生根培养的条件：培养温度为25±2℃，湿度为60％～70％，光照强度为3000 lx~5000 lx，日照时间为12～14h/d。

7.一种如权利要求1~6任一所述方法在培育无毒百合幼苗中的应用。