[发明专利]一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法及其应用

说明书

本发明提供了一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法及其应用，以百合鳞片或珠芽为材料，培养无菌小鳞茎，采用37℃和23～25℃变温交替处理，再结合95℃高温处理和处理时间的精准把控，大大提高了鳞片叶尖对百合病毒CMV、LSV和LMoV的脱毒效率，剥取的叶尖长度为1.0～2.0mm，该长度的叶尖不需要借助解剖镜等仪器设备，且通常1个小鳞茎有6‑10个甚至更多的叶尖，取材更容易，操作简便，成本低。与传统热处理相比，本发明的热处理耗时短、脱毒率高。本发明突破了现有技术常以茎尖培养为主，为培育百合无毒苗提供了新途径，具有良好的应用前景，为工厂化育苗奠定了基础。

技术领域

本发明属于植物组培与脱毒技术领域，具体涉及一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法及其应用。

背景技术

百合是多年生球根花卉，种类和品系均多，花期较长，花朵硕大，色彩丰富，花姿优美；既具有极佳的观赏价值，又具有极好的药用价值和食用价值。西伯利亚(Lilium‘siberia’)是市场上畅销的主要切花百合之一，属东方系百合，花大，纯白色，目前市场价格一支售价在15元左右。近年来随着百合生产规模的扩大，种球自繁，快速流通使得百合病毒病累积日趋严重。百合生产上多采用种球或鳞片进行无性繁殖，但无性繁殖存在着繁殖系数小、病毒不断累积等弊端，导致植株极易发生病毒。目前已报道侵染百合的病毒达19余种，其中最主要的病毒为百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)等。百合感染病毒后，百合花色暗淡、叶片畸形，甚至植株枯死，破坏植株正常生理机能，造成产量下降、品质变劣，严重危害‘西伯利亚’百合的产量和品质(马平霞，2007，‘西伯利亚’百合脱毒及病毒检测.硕士学位论文.兰州:西北师范大学.)，给百合生产造成严重问题(丰先红,李健,罗孝贵.百合病毒脱除技术研究进展[J].农学学报,2015,5(9):91-95.)。利用化学药剂或生物制剂难以对病毒病进行有效防治，直接利用百合脱毒苗已成为控制病毒病的重要措施(沈淑琳.百合病毒病及其检验[J].植物检疫,1996,10(4):223-226.)。因此，建立一种百合高效脱毒快繁技术，对其产业发展具有重要意义。

目前百合脱毒技术主要以百合微茎尖培养为主，并结合其它处理方式。如王超等取变温处理(每天在38℃下光照处理16h，25℃下黑暗处理8h)培养的百合植株，切取大小为0.5～0.8mm的茎尖，接于含病毒唑浓度为10mg/L的培养基中，CMV脱毒率不足65％，而LSV不足50％，且成活率为57.62％(王超,王文和,赵祥云,等.百合病毒脱除技术研究[J].北京农学院学报,2012,27(1):25-28.)。高慧卿等将百合组培苗65℃高温预处理30min后，剥取0.2～0.5mm茎尖进行脱毒培养，CMV和LSV的脱毒率分别为46.88％和74.65％，但平均成活率不到60％(高慧卿,樊兰瑛,王秀红,等.茎尖培养及热处理技术在百合脱毒中的应用研究[J].山西农业大学学报,2010,30(6):528-532.)。周晓波等将卷丹珠芽置于38℃高温条件处理20d后，剥取0.4～0.6mm茎尖，接种在添加5～10mg/L病毒唑的芽诱导培养基中，脱毒率可达90％，但成活率仅为60％左右(周晓波,吴艺飞,丁茁荑,等.卷丹百合3种主要病毒脱毒方法研究[J].湖南农业科学,2016,(10):7-10.)。但上述方法剥离的茎尖小，均小于0.8mm，茎尖不易剥取，还需要借助解剖镜等仪器设备，成本较高，且通常1个小鳞茎仅有1个茎尖，取材困难，热处理时间长。研究发现，热处理温度高于70℃条件下植物病毒可以被有效杀灭，并且温度越高脱毒率越高，但幼苗的存活率随之降低，因此如何调控热处理温度而又使幼苗植株能够存活下来成为植物脱毒生产的关键。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供了一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法及其应用，解决现有百合脱毒方法具有茎尖取材困难、成本高、热处理时间长的问题。

为实现上述目的，本发明采用如下方案：一种基于百合鳞片叶尖的高温脱毒方法，包括以下步骤：