[发明专利]建立小鼠腹透腹膜损伤模型的方法及BMSCs外泌体的应用

说明书

本发明涉及一种建立小鼠腹透腹膜损伤模型的方法，将腹膜炎患者透析后的腹透流出液注射到小鼠腹腔内。进一步以所建立的小鼠腹透腹膜损伤模型为基础，不断研究可治疗腹透相关性腹膜损伤的治疗方法，最后通过动物实验明确外泌体修复腹透腹膜损伤的作用、摸索最优治疗途径、时机、剂量、频次和疗程，为应用外泌体防治腹透腹膜纤维化奠定坚实理论基础，也为未来解决腹透腹膜纤维化导致过早腹膜失功的重要临床问题提供创新有效安全的方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及建立小鼠腹透腹膜损伤模型的方法及BMSCs外泌体的应用。

背景技术

腹膜透析(Peritoneal Dialysis，PD)是目前终末期肾病患者广泛采用的重要肾脏替代治疗方式之一，是利用腹膜半透膜生物学特性进行溶质、毒素和水分清除的治疗模式。腹膜透析具有对血流动力学影响小、保护残余肾功能、操作简单、价格相对低廉、保持更好的生活质量等独特优势。随着腹膜透析技术的推广，我国腹膜透析人数和规模呈不断上升的趋势。然而，多数腹透患者往往由于腹透相关性腹膜炎、长期腹透流出液高糖暴露等原因而发生腹膜结构和功能损伤，最终导致腹膜纤维化、超滤衰竭而不得不提前终止腹透治疗。腹膜纤维化发展的主要危险因素是腹膜反复暴露于生物不相容性的腹膜透析液(葡萄糖、葡萄糖降解产物(乙二醛、甲醛、3-脱氧葡糖酮、甲基乙二醛))引起的腹膜间皮细胞功能改变及增殖，以及感染或腹透流出液长期刺激下导致的以免疫细胞浸润为特征的急慢性炎症，二者往往相互促进导致腹膜结构功能进一步损伤。目前，预防或延缓腹透相关性腹膜纤维化尚无有效方法。因此，研发腹透相关性腹膜损伤修复方法和治疗药物显得至关重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种建立小鼠腹透腹膜损伤模型的方法，还提供一种BMSCs外泌体在制备腹透腹膜损伤疾病的药物中的新应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1.一种建立小鼠腹透腹膜损伤模型的方法，所述方法的具体步骤为：将人腹膜炎腹透流出液注射到小鼠腹腔内。

进一步，所述腹透流出液为腹膜炎患者透析后的液体经离心、细菌过滤得到的。

进一步，腹膜炎患者腹透流出液的纳入标准为：

a.首次入院夜间留腹；b.未使用抗生素；c.腹水培养革兰氏阴性杆菌；d.腹水检测白介素-65000pg/ml，降钙素原0.3ng/ml、内毒素0.1EU/mL。

进一步，腹腔注射人腹膜炎腹透流出液0.1mL/g，每日1次，持续4-6周。

2.BMSCs外泌体在制备腹透腹膜损伤疾病的药物中的应用。

进一步，所述BMSCs外泌体来源于BMSCs细胞培养上清液。

进一步，所述BMSCs外泌体的制备方法为：取BMSCs细胞培养上清液，2000-3000g 4℃离心30min，取上清；上清经0.22μm滤膜过滤，滤液经100,000-120,000g 4℃超速离心1.5-2h；用相同体积的预冷PBS重悬沉淀，悬液经4℃100,000-120,000g离心1.5-2h；沉淀再用预冷PBS重悬即可。

进一步，所述BMSCs外泌体的制备方法为：取BMSCs细胞培养上清液，2000g 4℃离心30min，取上清；上清经0.22μm滤膜过滤，滤液经120,000g 4℃超速离心2h；用相同体积的预冷PBS重悬沉淀，悬液经4℃120,000g离心2h；沉淀再用预冷PBS重悬即可。

进一步，所述BMSCs外泌体的应用方法为腹腔注射。

进一步，BMSCs外泌体腹腔注射量为按体重计100μg/kg/次。