[发明专利]一种口蹄疫（OAA1）三重荧光RT-PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种口蹄疫（OAA1）三重荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，包括引物对和探针，所述引物对包括O-F与O-R、A-F与A-R、Asia1-F与Asia1-R三对引物对，所述探针为TaqMan探针O-P、A-P，Asia1-P，其中，三对引物对和对应的TaqMan探针序列如下：

O-F：5’-ACCCACGGACGAACATGA-3’；SEQ ID NO：1；

O-R：5’-GATGTTGGCATACACCTTGA-3’；SEQ ID NO：2；

A-F：5’-TGCACTTCA TGTTTACTGGC-3’；SEQ ID NO：3；

A-R：5’-GTGTCCCATTCTGCGTGG-3’；SEQ ID NO：4；

Asia1-F：5’-ACACTGATGTCGCCTTC-3’；SEQ ID NO：5；

Asia1-R：5’-GCATGAGATCAAGGGTTTG-3’；SEQ ID NO：6；

O-P: 5′-FAM-ACGACCAGTACAAGGTTCACAA-3′-BHQ-1；SEQ ID NO：7

A-P: 5′-VIC-ACGCCACCGGACACACCTGAGAA-3′-BHQ-1；SEQ ID NO：8

Asia1-P: 5′-ROX-GTGAAACTCACCCAGCCCAAGAG-3′-BHQ-2；SEQ ID NO：9。

2.如权利要求1所述的口蹄疫（OAA1）三重荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的RT-PCR反应体系为：反转录试剂E Mix 0.5μl, 扩增试剂2×Hieff® TaqManmulitiplex qPCR master mix 10μl，引物O-F与O-R、A-F与A-R、Asia1-F与Asia1-R各0.15μl，合成探针O-P、A-P、Asia1-P各0.3μl，模板2μl，加ddH₂O 至20μl；引物O-F与O-R、A-F与A-R、Asia1-F与Asia1-R的浓度为50μM，合成探针O-P、A-P、Asia1-P的浓度为20μM。

3.如权利要求1所述的口蹄疫（OAA1）三重荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的RT-PCR反应程序为：反转录：42℃ 15 min; 预变性：95℃ 30s；PCR扩增94℃ 10s，60℃ 20s，40个循环，此处采集荧光信号，选择荧光通道FAM\VIC\ROX。