[发明专利]一种口蹄疫（OAA1）三重荧光RT-PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种口蹄疫（OAA1）三重荧光RT‑PCR检测试剂盒，包括引物对和探针，所述引物对包括O‑F与O‑R、A‑F与A‑R、Asia1‑F与Asia1‑R三对引物对，所述探针为TaqMan探针O‑P、A‑P，Asia1‑P，其中，三对引物对和对应的TaqMan探针序列。本发明试剂盒可以用于动物水疱液、乳汁、尿液、口涎、泪液和粪便中的O\A\亚1型口蹄疫病毒检测。且整个过程中，扩增检测只需54min，便可实现三种亚型的鉴别检测，大大缩短检测时间，提高检测效率。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫（OAA1）三重荧光RT-PCR检测试剂盒。

背景技术

口蹄疫（FMD），是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄动物传染病。我国将其列为一类动物疫病。本病具有流行快、传播广、发病急、危害大等流行病学特点，疫区发病率可达50%-100%，犊牛死亡率较高，其他则较低。病畜和潜伏期动物是最危险的传染源。病畜的水疱液、乳汁、尿液、口涎、泪液和粪便中均含有病毒。

口蹄疫病毒常见的分型有O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3等7个血清型，每个分型均可细分多个拓扑型，且血清型间无交叉免疫现象。亚洲地区是该病最为严重的地区之一，其中以O型、A型、亚洲1型为主，在症状上分型之间无明显差异，需要分子诊断等技术进行鉴别。

鉴于口蹄疫病毒的高度变异性，市场上的核酸诊断试剂以通用型检测为主，或是重点关注最为流行的口蹄疫O型；近年来，猪群中存在塞尼卡谷病毒等症状类似的病原，在具体诊断上或是难以鉴别出具体的亚型或是误判为其它的病原。

因此，本项目计划实现对三种亚型同步检测，研制口蹄疫病毒O\A\亚1型三重荧光RT-PCR检测试剂盒，可54分钟内完成检测，不仅减少误判几率、提升亚型的准确判断，也能降低时间成本和人工成本，从而为养殖业提供一份技术支撑。

发明内容

针对目前目的是为了提供一种口蹄疫病毒O\A\亚1型三重荧光RT-PCR检测试剂盒，实现口蹄疫病毒O\A\亚1型的快速检测。

为实现上述目的，本发明提供一种口蹄疫病毒O\A\亚1型三重荧光RT-PCR检测试剂盒，包括引物对和探针，所述引物对包括O-F与O-R、A-F与A-R、Asia1-F与Asia1-R三对引物对，所述探针为TaqMan探针O-P、A-P，Asia1-P，其中，三对引物对和对应的TaqMan探针序列如下：

O-F：5’-ACCCACGGACGAACATGA-3’；SEQ ID NO：1；

O-R：5’-GATGTTGGCATACACCTTGA-3’；SEQ ID NO：2；

A-F：5’-TGCACTTCA TGTTTACTGGC-3’；SEQ ID NO：3；

A-R：5’-GTGTCCCATTCTGCGTGG-3’；SEQ ID NO：4；

Asia1-F：5’-ACACTGATGTCGCCTTC-3’；SEQ ID NO：5；

Asia1-R：5’-GCATGAGATCAAGGGTTTG-3’；SEQ ID NO：6；

O-P: 5′-FAM-ACGACCAGTACAAGGTTCACAA-3′-BHQ-1；SEQ ID NO：7

A-P: 5′-VIC-ACGCCACCGGACACACCTGAGAA-3′-BHQ-1；SEQ ID NO：8

Asia1-P: 5′-ROX-GTGAAACTCACCCAGCCCAAGAG-3′-BHQ-2；SEQ ID NO：9