[发明专利]成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测试剂盒，其特征在于包括探针、缓冲液、杂交混合液、连接酶混合液，所述探针为13个，13个探针分别为IKZF1、EBF1、CDKN2A、CDKN2B、PAX5、ETV6、BTG1、RB1、SHOX-AREA、CRLF2、CSF2RA、IL3RA、P2RY8探针。

2.一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测方法，其特征在于利用MLPA技术进行检测，其具体检测方法为：

一、标本采集及单个核细胞的分离并提取骨髓单个核细胞的DNA；二、MLPA步骤：

(1)DNA变性：取5ul(20ng/ul)的样品，98℃处理5min，温度降到25℃暂停；

(2)探针与DNA的杂交：取出上述步骤的样品，降至室温，加入3ul的杂交混合液，然后升温至95℃，保持1分钟，在进行60℃温浴18h，得到杂交探针；

(3)进行杂交探针的连接：

A、PCR仪降到54℃，打开管盖；

B、加入32ul连接酶混合液，54℃温浴15分钟；

C、98℃加热5min灭火连接酶后20℃暂停，得到连接探针；

(4)进行连接探针的PCR扩增：

A、从PCR仪中取出样品，降至室温；

B、加入10ul PCR混合液；

C、PCR扩增，95℃-30s，60℃-30s，72℃-60s，35个循环后，72℃-20min，15℃暂停；

(5)PCR产物的毛细管电泳：取0.5ul样品、0.5ulLIZ SIZE Standard、9ul Hi-DiTMFormamide进行操作。

(6)结果分析：所得结果通过Coffalyser软件进行半定量分析，了解目的基因的片段缺失或扩增情况。

3.按照权利要求2所述的一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测方法，其特征在于所述杂交混合液为1.5ul SASLAS probemix、1.5ulMLPA缓冲液。

4.按照权利要求2所述的一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测方法，其特征在于所述32ul连接酶混合液为3ul ligase bufferA、3ul ligase bufferB、25ul water、1ul ligase-65。

5.按照权利要求2所述的一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测方法，其特征在于所述PCR混合液为7.5ul water、2ul PCRPrimerMix、0.5ul SALSAPolymerse。

6.按照权利要求1所述的一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测试剂盒，其特征在于所述探针上具有荧光标记和通用引物，所述通用引物为IKZF1、EBF1、CDKN2A、CDKN2B、PAX5、ETV6、BTG1、RB1、SHOX-AREA、CRLF2、CSF2RA、IL3RA、P2RY8。

7.按照权利要求1所述的一种成人Ph-B-ALL预后相关基因拷贝数变异检测试剂盒，其特征在于试剂盒为MLPA(P335)试剂盒。