[发明专利]一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，步骤如下：称取50mg枇杷叶三萜酸组分，500mg泊洛沙姆188，溶解于12.5mL肉豆蔻酸异丙酯中，再将该溶液缓慢滴入37.5mL高纯水中，均匀持续搅拌2h，即得O/W型纳米乳。

2.如权利要求1所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，枇杷叶三萜酸组分的制备步骤如下：

准确称取枇杷叶1kg，粗碎，以14.4倍量82％乙醇，回流提取2次，每次155min，合并滤液，浓缩，冷冻干燥，取部分提取液冻干粉，加蒸馏水溶解，上AB-8大孔树脂柱吸附，收集90％乙醇洗脱液，60℃减压浓缩，冷冻干燥得枇杷叶三萜酸组分。

3.如权利要求1所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，枇杷叶三萜酸组分的含量纯测定的步骤包括溶液的配制、标准曲线的绘制、加样回收率试验三个步骤。

4.如权利要求3所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，溶液的配制的步骤如下：

熊果酸标准溶液的配制：精密称称熊果酸标准品4.7mg，置于50mL容量瓶中，甲醇溶解定容，得到熊果酸标准储备溶液，备用；

样品溶液的制备：精密称取枇杷叶三萜酸组分16.6mg，精密加入50mL甲醇，称定质量，超声溶解，放冷，甲醇补足减失质量，摇匀，10000r·min-1离心20min，取上清液作为样品溶液。

5.如权利要求3所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，标准曲线的绘制包括如下步骤：

精密移取0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mL浓度为94μg·mL-1熊果酸标准溶液至5个比色管中，80℃水浴挥干，依次加入0.4mL 5％香草醛-冰醋酸、0.8mL高氯酸，水浴加热15min，冰浴冷却5min，加冰醋酸5.0mL，混匀，以试剂空白对照，利用紫外可见分光光度计，于546nm处测定吸光度，记录结果，计算得回归方程为Y＝0.0135C+0.1348，r＝0.9995。

6.如权利要求3所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，加样回收率试验的步骤如下：

精密移取3.0mL样液6份，分别加入浓度为47μg·mL-1熊果酸标准溶液0.5mL，按“2.3”方法操作并测定吸光度，计算得加样回收率为101.5％。

7.如权利要求1所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，枇杷叶三萜酸组分纳米乳的形态观察和粒径测定步骤如下：

取纳米乳并适当稀释，滴加至铜网上，用2％磷钨酸钠溶液复染，在透射电镜下观察纳米乳的大小及形态，另取适量纳米乳，利用马尔文激光粒度仪测定粒径、多分散系数(PDI)和Zeta电位。

8.如权利要求1所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，其特征在于，枇杷叶三萜酸组分纳米乳的的包封率及载药量步骤如下：

精密移取5.0mL纳米乳置于超滤离心管中，4000r·min-1离心20分钟，超滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，供UV法测定游离的三萜酸含量，另取2.5mL纳米乳置于超滤离心管中，加入2.5mL甲醇破乳后，同法测得纳米乳中的三萜酸含量，计算包封率和载药量。

9.如权利要求1所述的枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法制备的枇杷叶三萜酸组分纳米乳在抗肿瘤活性中的应用。