[发明专利]一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法及其应用，步骤如下：称取50mg枇杷叶三萜酸组分，500mg泊洛沙姆188，溶解于12.5mL肉豆蔻酸异丙酯中，再将该溶液缓慢滴入37.5mL高纯水中，均匀持续搅拌2h，即得O/W型纳米乳。粒径为76.8±1.6nm，多分散系数(PDI)为0.22±0.03，说明粒径符合纳米乳被动靶向要求；Zeta为‑30.2±1.8，粒子间排斥力较大，说明该纳米乳的稳定性较好；包封率为88.32±3.42％，载药量为8.68±0.35％，说明纳米乳载药性能优良。MTT实验发现。在制成纳米乳后，枇杷叶三萜酸组分对肺癌细胞Lewis的抑制作用增强，Lewis肺癌细胞孵育24h的IC₅₀由32.27μmol·L^‑1降低至24.89μmol·L^‑1；采用枇杷叶三萜酸组分纳米乳，孵育肺癌细胞Lewis 2h，摄取率由25.71％增加至46.05％。

技术领域

本发明涉及一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备，特别涉及一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法及其应用。

背景技术

枇杷叶为蔷薇科植物枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.的叶子，具有清肺止咳，和胃降逆的功效，含有明显抗肿瘤活性的三萜酸类成分，但也同时含有许多与抗肿瘤活性无关的成分。

随着中药研究的不断深入，等效成分群和有效组分作为主要的药效物质基础已经得到了广泛认可。

在中药科研过程中常用HPLC色谱进行制备，李萍等利用细胞膜固相色谱技术和LC/ESI/MS/MS分析技术，选择性对峰面积百分比大于0.1％的18个成分收集，制备得到丹参滴丸的等效成分群，其生物活性落在丹参滴丸制剂活性的70—143％。目前，HPLC制备色谱仅适用于少量样品的制备，很难满足工业化、规模化生产的要求，能否采用现有的工业条件获得等效成分群/有效组分则是大家关心的问题。纳米乳是一种新型口服给药系统，它是油相、水相和乳化剂/助乳化剂形成的稳定、均一和各向同性的混合物，能促进难溶性药物的溶出，提高生物利用度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法及其应用，将枇杷叶三萜酸组分制成纳米乳后，其对肺癌细胞Lewis肺癌细胞的抑制作用增强，细胞对药物的摄取率也有一定的提高。与枇杷叶三萜酸组分相比，三萜酸组分纳米乳的抗肿瘤活性有所增强，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种枇杷叶三萜酸组分纳米乳的制备方法，步骤如下：称取50mg枇杷叶三萜酸组分，500mg泊洛沙姆188，溶解于12.5mL肉豆蔻酸异丙酯中，再将该溶液缓慢滴入37.5mL高纯水中，均匀持续搅拌2h，即得O/W型纳米乳。

进一步地，枇杷叶三萜酸组分的制备步骤如下：

准确称取枇杷叶1kg，粗碎，以14.4倍量82％乙醇，回流提取2次，每次155min，合并滤液，浓缩，冷冻干燥，取部分提取液冻干粉，加蒸馏水溶解，上AB-8大孔树脂柱吸附，收集90％乙醇洗脱液，60℃减压浓缩，冷冻干燥得枇杷叶三萜酸组分。

进一步地，枇杷叶三萜酸组分的含量纯测定的步骤包括溶液的配制、标准曲线的绘制、加样回收率试验三个步骤。

进一步地，溶液的配制的步骤如下：

熊果酸标准溶液的配制：精密称称熊果酸标准品4.7mg，置于50mL容量瓶中，甲醇溶解定容，得到熊果酸标准储备溶液(质量浓度为94μg·mL-1)，备用；

样品溶液的制备：精密称取枇杷叶三萜酸组分16.6mg，精密加入50mL甲醇，称定质量，超声溶解，放冷，甲醇补足减失质量，摇匀，10000r·min-1离心20min，取上清液作为样品溶液。

进一步地，标准曲线的绘制包括如下步骤：