[发明专利]膨腹海马性别鉴定SNP位点及性别鉴定方法

说明书

本发明提供了一种膨腹海马性别鉴定SNP位点及性别鉴定方法，所述SNP位点所在的碱基序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5。所述膨腹海马性别鉴定方法，包括以下步骤，S1，提取膨腹海马DNA；S2，以提取的DNA为模板，进行PCR，扩增序列SEQ ID No.1‑SEQ ID No.5，序列SEQ ID No.1‑SEQ ID No.5对应的PCR引物依次为SEQ ID No.6‑SEQ ID No.15所示；S3，将PCR产物进行测序验证，并根据所述SNP位点判断海马的雌性；若SNP位点为杂合型，则为雄性，若SNP位点为纯合型，则为雌性。

技术领域

本发明涉及一种膨腹海马性别鉴定SNP位点及性别鉴定方法，属于膨腹海马性别鉴定技术领域。

背景技术

膨腹海马(Hippocampus abdominalis)，又称大腹海马，为辐鳍鱼纲棘背鱼目海龙科海马属的其中一种，是所有已知海马中最大的一种，分布于西南太平洋区的澳洲及新西兰海域，栖息深度可达109米。膨腹海马常栖息在礁石区，随着海草游动，属肉食性，以小型甲壳类为食，卵胎生。特征是肚子圆鼓。体长达35厘米。环12至13个，背鳍鳍条27-28枚；胸鳍鳍条15-17枚；无尾鳍，具有突出的圆形眼棘。体灰白色，在头部与躯干上有深色的斑点与污点；尾部有交互的深色与淡色的条纹，雄鱼有的黑色斑块比雌性多。夜间活动，属肉食性，以小型甲壳类为食。雄性大腹海马有育儿袋但是不繁殖，雌性将卵产在育儿袋中，雄性受精进入妊娠期，30天左右孵化出1100个幼仔，之后幼仔离开育儿袋肚子生活。

膨腹海马性别鉴定对雌雄膨腹海马分开选育和养殖至关重要。现有性别主要依赖于形态学观察，无法准确判断，也无法进行早期性别鉴定。

发明内容

本发明提供了一种膨腹海马性别鉴定SNP位点及性别鉴定方法，可以有效解决上述问题。

本发明是这样实现的：

一种膨腹海马性别鉴定SNP位点，所述SNP位点所在的碱基序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5。

一种膨腹海马性别鉴定方法，包括以下步骤，

S1，提取膨腹海马DNA；

S2，以提取的DNA为模板，进行PCR，扩增序列SEQ ID No.1-SEQ ID No.5，序列SEQID No.1-SEQ ID No.5对应的PCR引物依次为SEQ ID No.6-SEQ ID No.15所示；

S3，将PCR产物进行测序验证，并根据所述SNP位点判断海马的雌性；若SNP位点为杂合型，则为雄性，若SNP位点为纯合型，则为雌性。

作为进一步改进的，步骤S1的具体为：提取膨腹海马分泌物，采用CTAB法提取膨腹海马基因组DNA。

作为进一步改进的，所述PCR反应的反应体系为：2×Taq PCR MaterMix 1.0μL、DNA模板1.0μL、浓度10μM的引物F 0.4μL、浓度为10μM的引物R 0.4μL和水2μL。

作为进一步改进的，所述PCR的反应程序为：95℃变性4min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸45s，循环次数为40次；72℃延伸10min，16℃保存。

一种膨腹海马性别鉴定试剂盒，包括膨腹海马DNA提取试剂盒，序列SEQ ID No.1-SEQ ID No.5对应的PCR引物，2×Taq PCR MaterMix。

本发明的有益效果是：

1、本发明提供一种确鉴定膨腹海马性别的方法，采用特异引物扩增包含性别连锁SNP位点序列的片段，经过测序分析SNP位点，最终确定膨腹海马性别。