[发明专利]一种用桦褐孔菌提取黑玉米花青素的方法

说明书

本发明公开了一种用桦褐孔菌提取黑玉米花青素的方法，包括如下步骤：(1)黑玉米穗轴预处理：清洗、干燥后，粉碎，过筛；(2)菌源液制备：将桦褐孔菌菌株于PDA培养基上培养得到菌丝体；再将菌丝体转移至液体培养基，培养得到菌源液；(3)花青素提取：在蒸馏水中加入黑玉米穗轴粉碎物和酵母提取物形成培养液；接种菌源液，振荡培养7‑10天，收集培养液；将培养液通入反渗透装置，得到浓缩液；将浓缩液通入树脂柱，以酸性乙醇进行洗脱，得到洗脱液；将洗脱液通入真空减压蒸馏器，回收溶剂，再对蒸馏物进行干燥即得到花青素粉末。本发明首次采用桦褐孔菌提取黑玉米花青素，提取效率高，生物安全，为黑玉米花青素的利用打开了广阔空间。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用桦褐孔菌提取黑玉米花青素的方法。

背景技术

花青素又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属类黄酮化合物。研究表明，花青素是一种强有力的抗氧化剂、自由基清除剂，它能和蛋白质结合防止过氧化，从而具有预防心脑血管疾病，保护肝脏、预防癌症、增进视力、改善睡眠等保健作用。

黑玉米中的花青素含量高，并且黑玉米穗轴中的花青素含量远高于籽粒，是花青素的重要来源。

发明内容

本发明的目的是提供一种用桦褐孔菌提取黑玉米花青素的方法，具有成本低、安全性高的优点。

根据本发明的用桦褐孔菌提取黑玉米花青素的方法，包括如下步骤：

(1)黑玉米穗轴预处理

黑玉米穗轴清洗、干燥后，粉碎，过筛，将粉碎物用于后续培养；

(2)菌源液制备

将桦褐孔菌菌株于PDA培养基上28℃培养20-30天，得到菌丝体，于4℃保存；

将上述菌丝体转移至液体培养基，28℃振荡培养5-7天，得到菌源液；

本发明先在PDA培养基上对桦褐孔菌进行预培养，保证菌丝体的质量；然后再将菌丝体转移至液体培养基进行快速培养，菌株培养效率大大提高，并制成菌源液便于后续接种。

(3)花青素提取

在蒸馏水中加入黑玉米穗轴粉碎物和酵母提取物，高压灭菌后形成培养液；按培养液体积的6-10％接种菌源液，振荡培养7-10天，收集培养液；

将培养液通入反渗透装置，进行初步纯化浓缩，得到浓缩液；

将浓缩液通入树脂柱，以酸性乙醇进行洗脱，得到洗脱液；

将洗脱液通入真空减压蒸馏器，回收溶剂，再对蒸馏物进行干燥即得到花青素粉末。

优选情况下，步骤(1)中粉碎物的粒径大小为60目-100目之间。合适粒径的黑玉米穗轴粉碎物对后续的发酵培养具有重要影响，小于100目的粉碎物其组织成分容易在空气中发生氧化。

优选情况下，步骤(2)中液体培养基的重量组分为：蔗糖1％、麦芽糖1％、蛋白胨0.5％、酵母提取物0.2％、KH₂PO₄ 0.1％、MgSO₄ 0.2％、CaCl₂ 0.1％、余量为水。该培养基有利于菌丝的生长，得到的菌球数量更多。

优选情况下，步骤(3)培养液中黑玉米穗轴粉碎物的质量配比为10-20％，酵母提取物的质量配比为0.5-1％。

优选情况下，步骤(3)反渗透装置采用复合膜，孔径0.5nm，操作条件为：进口压力4MPa，出口压力3.5MPa，平均通量9L/h·m²，以达到10：1-8：1的浓缩效果，提升下一步的效率。