[发明专利]一种促进人胚胎干细胞均一分化为限定性内胚层细胞的方法

权利要求书

1.一种促进人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞的方法，包括如下步骤：在促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中，在分化培养基中加入G1期抑制剂，实现促进人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

(A1)将人胚胎干细胞在额外添加有G1期抑制剂的第一阶段诱导培养液中诱导培养，使人胚胎干细胞分化为中内胚层细胞；

(A2)将步骤(A1)所得中内胚层细胞在额外添加有G1期抑制剂的第二阶段诱导培养液中诱导培养，使中内胚层细胞分化为限制性内胚层细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述G1期抑制剂为帕博西尼。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述第一阶段诱导培养液中含有如下因子：ITS-supplement、Activin A和Wnt3A；和/或

所述第二阶段诱导液中含有如下因子：ITS-supplement和Activin A。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在所述第一阶段诱导培养液中额外添加的帕博西尼的终浓度为1-3μM；和/或

在所述第二阶段诱导培养液中额外添加的帕博西尼的终浓度为1-3μM；和/或

在所述第一阶段诱导培养液中，所述ITS-supplement体积含量为0.2‰，所述ActivinA的终浓度为100ng/mL，所述Wnt3A的终浓度为50ng/mL；和/或

在所述第二阶段诱导培养液中，所述ITS-supplement体积含量为0.5‰，所述ActivinA的终浓度为100ng/mL。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述第一阶段诱导培养液为将所述ITS-supplement、所述Activin A的储存溶液和所述Wnt3A的储存溶液加入到仅含有浓度为0.05g/100mL的BSA的限定性内胚层分化基础培养基中，并使各物质达到其终浓度后所得；和/或

所述第二阶段诱导培养液为将所述ITS-supplement和所述Activin A的储存溶液加入到仅含有浓度为0.2g/100mL的BSA的限定性内胚层分化基础培养基中，并使各物质达到其终浓度后所得；

进一步地，所述限定性内胚层分化基础培养基为RPMI 1640。

7.根据权利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于：步骤(A1)中，所述诱导培养的时间为1天；和/或

步骤(A2)中，所述诱导培养的时间为2天。

8.利用权利要求1-7中任一所述方法制备得到的限制性内胚层细胞。

9.成套产品，由G1期抑制剂、权利要求2-6任一中所述的第一阶段诱导培养液和权利要求2-6任一中所述的第二阶段诱导培养液组成；

进一步地，所述G1期抑制剂为帕博西尼。

10.如下任一应用：

P1、权利要求1-7中任一所述方法在提高由人胚胎干细胞分化而成的限定性内胚层细胞中SOX17强阳性细胞比例中的应用；

P2、G1期抑制剂在促进人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞中的应用；

P3、G1期抑制剂在提高由人胚胎干细胞分化而成的限定性内胚层细胞中SOX17强阳性细胞比例中的应用；

进一步地，P2和P3中所述G1期抑制剂为帕博西尼；

P4、权利要求9所述成套产品在促进人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞中的应用；

P5、权利要求9所述成套产品在提高由人胚胎干细胞分化而成的限定性内胚层细胞中SOX17强阳性细胞比例中的应用。