[发明专利]一种欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株分泌欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体。

2.一种欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述的欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体特异性识别欧洲型PRRSV-N蛋白，所述的单克隆抗体由本发明第一方面所述的杂交瘤细胞株分泌所得。

3.如权利要求2所述的欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述欧洲型PRRSV-N蛋白，其对应的PCR扩增产物可由以下特异性引物PCR扩增所得：

1)上游引物F：CGCGGATCCATGGCCGGTAAAAA(SEQ ID NO.1)；

2)下游引物R：CCGGAATTCTCAATTTGCATCCT(SEQ ID NO.2)；

其中，上游引物F的5’端引入BamHI酶切位点，下游引物R的5’端引入EcoRI酶切位点。

4.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：

(i)如权利要求2所述的单克隆抗体；以及

(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

5.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：

(a)如权利要求2所述的单克隆抗体；和

(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。

6.一种药物组合物，其特征在于，它含有：

(i)如权利要求2所述的单克隆抗体、或如权利要求5所述的重组蛋白、或如权利要求6

所述的免疫偶联物；以及

(ii)药学上可接受的载体。

7.如权利要求1所述的单克隆抗体、如权利要求5所述的重组蛋白、或如权利要求6所述的免疫偶联物的用途，其特征在于，用于制备药剂、试剂、检测板或试剂盒；

所述药剂、试剂、检测板或试剂盒用于检测PRRSV-N蛋白。

8.一种欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备高纯度欧洲型PRRSV-N蛋白；

2)以步骤1)制备所得的欧洲型PRRSV-N蛋白为免疫原免疫小鼠；

3)将免疫鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合，制备杂交瘤细胞；

4)将步骤3)制备所得的杂交瘤细胞进行阳性克隆筛选，获得阳性单克隆杂交瘤细胞株；

5)将步骤4)所得的阳性单克隆杂交瘤细胞株，诱生腹水，经纯化，得到欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体。

9.如权利要求1所述的杂交瘤细胞株、如权利要求2所述的欧洲型PRRSV-N蛋白单克隆抗体、如权利要求4所述的重组蛋白、如权利要求5所述的免疫偶联物、如权利要求6所述所述的药物组合物、如权利要求7所述的用途、或如权利要求8所述的欧洲型PRRSV-N蛋白的制备方法在制备PRRSV-N蛋白检测试剂盒中的应用。