[发明专利]痕量微小核糖核酸的电化学检测方法

权利要求书

1.一种痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)在电极表面修饰DNA探针Probe A；

2)将步骤1)得到的电极置于需检测miRNA浓度的样品中；

3)向步骤2)的样品中再加入DNA探针Probe B和Probe C；

4)将步骤3)得到的电极浸泡到表面修饰有DNA探针Probe D的金纳米颗粒溶液中；

5)对步骤4)得到的电极进行电化学分析，通过电化学信号计算出样品中的待检测的miRNA的浓度；

其中，Probe A、Probe B和Probe C均为茎环结构DNA，Probe A的环状部分的序列与待检测的miRNA互补配对，待检测的miRNA可打开Probe A的茎部；Probe A的茎部打开后释放的单链DNA序列可以依次打开Probe B、Probe C的茎环结构，发生杂交链式反应；Probe B和Probe C上暴露有相同序列的单链区域，Probe D上具有与该单链区域互补配对的DNA序列，使得Probe A、Probe B和Probe C反应形成的长链能够捕获修饰有Probe D的金纳米颗粒，从而能够利用反应后的电化学信号来表征待检测的miRNA的浓度。

2.根据权利要求1所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，待检测的miRNA为miR-21，其核酸序列为：

5’-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’；

Probe A的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCTTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAACCTCCCC-(CH₂)₆-SH-3’。

3.根据权利要求1所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，待检测的miRNA为miR-141，其核酸序列为：

5’-UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG-3’；

Probe A的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCATCTTTACCAGACAGTGTGCTAAACCTCCCC-(CH₂)₆-SH-3’。

4.根据权利要求1所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，待检测的miRNA为miR-183，其核酸序列为：

5’-UAUGGCACUGGUAGAAUUCACU-3’；

Probe A的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCTGAATTCTACCAGTGCCAGCTAAACCTCCCC-(CH₂)₆-SH-3’。

5.根据权利要求1所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，待检测的miRNA为miR-155，其核酸序列为：

5’-UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGUU-3’；

对应的Probe A的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCCCTATCACGATTAGCATTGCTAAACCTCCCC-(CH₂)₆-SH-3’。

6.根据权利要求2-5中任意一项所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，Probe B的序列为：

5’-TAAGCTAAACCTTATGTACATTTCGACGAATAAGGTTAACCACCTCCGATA-3’。

7.根据权利要求6所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，Probe C的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCTTAAACCTTATTCGTCGAAGGCCACCTCCGATA-3’。

8.根据权利要求7所述的痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，其特征在于，Probe D的序列为：5’-SH-(CH₂)₆-TTTATCGGAGGTGG-MB-3’。