[发明专利]痕量微小核糖核酸的电化学检测方法

说明书

本发明公开了一种痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，包括以下步骤：1)在电极表面修饰Probe A；2)将电极置于样品中；3)向步骤2)的样品中再加入Probe B和Probe C；4)将电极浸泡到表面修饰有DNA探针Probe D的金纳米颗粒溶液中；5)对电极进行电化学分析，通过电化学信号计算出样品中的待检测的miRNA的浓度。本发明利用目标miRNA在电极界面诱导的茎环结构DNA开环，释放杂交链式反应的触发链，实现电极表面的原位DNA纳米结构生长，同时在产物侧链捕获修饰有互补DNA序列的金纳米颗粒，最终通过检测纳米颗粒表面DNA末端修饰的电信号分子，能实现对靶miRNA浓度的高灵敏检测。

技术领域

本发明涉及微小核糖核酸检测领域，特别涉及一种痕量微小核糖核酸的电化学检测方法。

背景技术

微小核糖核酸(miRNA)是一类具有调控功能的小分子非编码核糖核酸，与人类多种疾病特别是肿瘤的发生发展有关。miRNA的稳定性高、是一种极具潜力的肿瘤标志物，发展新型的miRNA检测方法对于实现相关疾病的早期诊断具有重要的意义。常规的检测手段如Northern blotting、荧光实时定量PCR、miRNA芯片等往往具有特定的劣势，包括灵敏度、操作步骤、成本等，因而限制了这些方法的广泛应用。因此，有必要开发一种快速、简单、高灵敏度、低成本的新型miRNA检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种痕量微小核糖核酸的电化学检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种痕量微小核糖核酸的电化学检测方法，包括以下步骤：

1)在电极表面修饰DNA探针Probe A；

2)将步骤1)得到的电极置于需检测miRNA浓度的样品中；

3)向步骤2)的样品中再加入DNA探针Probe B和Probe C；

4)将步骤3)得到的电极浸泡到表面修饰有DNA探针Probe D的金纳米颗粒溶液中；

5)对步骤4)得到的电极进行电化学分析，通过电化学信号计算出样品中的待检测的miRNA的浓度；

其中，Probe A、Probe B和Probe C均为茎环结构DNA，Probe A的环状部分的序列与待检测的miRNA互补配对，待检测的miRNA可打开Probe A的茎部；Probe A的茎部打开后释放的单链DNA序列可以依次打开Probe B、Probe C的茎环结构，发生杂交链式反应；ProbeB和Probe C上暴露有相同序列的单链区域，Probe D上具有与该单链区域互补配对的DNA序列，使得Probe A、Probe B和Probe C反应形成的长链能够捕获修饰有Probe D的金纳米颗粒，从而能够实现通过反应后的电化学信号来表征待检测的miRNA的浓度。

优选的是，待检测的miRNA为miR-21，其核酸序列为：

5’-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’；

Probe A的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCTTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAACCTCCC C-(CH₂)₆-SH-3’。

优选的是，待检测的miRNA为miR-141，其核酸序列为：

5’-UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG-3’；

Probe A的序列为：

5’-ATAAGGTTTAGCATCTTTACCAGACAGTGTGCTAAACCTCCCC-(CH₂)₆-SH-3’。