[发明专利]一种黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子及其应用

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01，其特征在于：黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

2.鉴别体系黄曲霉毒素产毒菌产毒力的方法，基于黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的含量检测，进行体系黄曲霉毒素产毒菌产毒力的鉴别，黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

3.鉴别曲霉属黄曲霉毒素产毒菌株产黄曲霉毒素能力的应用，其特征在于：具体应用方法包括：

（1）提供黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体：

（2）提供黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的多克隆抗体；

（3）待鉴别菌株的待测液的制备：待鉴别菌株培养，稀释，获得待鉴别菌株的待测液；

（4）待鉴别菌株产黄曲霉毒素能力的测定：

采用间接非竞争双抗体夹心法鉴别曲霉属黄曲霉毒素产毒菌株产黄曲霉毒素能力，步骤包括：酶标板中包被AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体，洗板；加入封闭液封闭，洗板；加入待测液反应，洗板；加入AFT-YJFZ01多克隆抗体反应，洗板；加入与黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的特异性多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体，反应，洗板；加入显色液反应；加入终止液，酶标仪读取并计算结果；

黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的步骤（3）为：将待鉴别菌株在常规察氏培养基或者其他适宜菌株生长的培养基培养，培养的环境温度为15 ~ 35 ℃，培养时间不少于12 h后，取培养基与培养物的混合体充分匀浆，再用无菌水稀释1-10倍，获得待鉴别菌株的待测液。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的步骤（4）为：

a将上述AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体用ELISA包被缓冲液配制0.2-8.0 μg/mL的包被液，再加入至酶标板中，4 ℃放置过夜或者37 ℃放置不少于2 h后，去除上述酶标板中包被液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；然后，以浓度不低于1％的脱脂奶粉作为封闭液，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，再弃去封闭液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；

b然后以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将待测液适当稀释，加入到酶标板孔中，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，弃去液体，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；

c然后，以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将上述AFT-YJFZ01的多克隆抗体适当稀释，加入到酶标板孔中，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，弃去液体，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；

d然后，以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将商业化的辣根过氧化物酶标记抗体根据需要稀释，加入到酶标板孔中，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，弃去液体，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；

e然后，先后加入ELISA常规的显色液、终止液，最后通过酶标仪读取并计算AFT-YJFZ01含量结果。