[发明专利]GFP转染肿瘤细胞的方法在检测肿瘤相关巨噬细胞吞噬功能中的应用

说明书

本发明属于免疫细胞治疗技术领域，具体涉及一种GFP转染肿瘤细胞的方法在检测肿瘤相关巨噬细胞吞噬功能中的应用。所述应用包括但不限于：(1)体外筛选药物制剂；(2)体外筛选吞噬细胞。本发明利用绿色荧光蛋白(GFP)稳定转染肿瘤细胞，然后筛选高表达GFP的肿瘤细胞进行荷瘤实验，实验结束后提取的TAM无需体外刺激培养，可直接上机检测吞噬功能，为探究肿瘤相关巨噬细胞的免疫抑制机制提供了一种新的解决方案。

技术领域

本发明属于免疫细胞治疗技术领域，具体涉及一种GFP转染肿瘤细胞的方法在检测肿瘤相关巨噬细胞吞噬功能中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

恶性肿瘤具有极大危害性，对其发生发展机制的研究一直是人们关注的重点。已有的研究认为在肿瘤局部微环境中，多数浸润的免疫细胞发生了表型和功能的改变，介导了促肿瘤的效应。越来越多的证据表明：肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在长期肿瘤微环境下，逐渐形成了独特的表型，同时功能上也发生了显著的改变。目前认为，巨噬细胞根据活化状态和发挥的功能主要可分为M1型，即经典活化的巨噬细胞(Classically activatedmacrophage)和M2型，即替代性活化的巨噬细胞(Alternatively activated macrophage)。M1型巨噬细胞可通过直接或分泌多种促炎性细胞因子杀伤病原体和肿瘤细胞；而由IL-4、IL-13、糖皮质激素、TGF-β和前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)等诱导产生的M2型巨噬细胞，表现为较低的抗原提呈能力，并可通过分泌抑制性细胞因子下调免疫应答。

吞噬是针对细菌·真菌等微生物的进入而最早启动的重要生物体防御机制之一。吞噬经过吞噬细胞引起的异物的识别、异物的摄入、吞噬体的形成、吞噬体内的异物消化、消化后的物质的吸收或排出这样连续的阶段。吞噬不仅针对细菌·真菌等外来异物而发生，也与炎症部位的自身组织残渣或代谢的自身细胞之类来自自身的无用物质的除去有关。吞噬细胞不只是将吞噬的物质在细胞内消化，有时也随着吞噬，将活性氧或蛋白质分解酶释放到细胞外。由此能够在局部有效地杀菌或组织消化，另一方面，有时自身组织也会被过度的吞噬反应破坏。例如在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis：RA)的病变部确认了过度吞噬自身免疫复合体的细胞(RA细胞)，已知由RA细胞释放出的蛋白质分解酶破坏组织，参与关节炎的进行。

目前对于体内TAM吞噬功能的检测目前集中的方法是提取肿瘤部位TAM，利用PKH67染料体外验证其吞噬功能。发明人发现，该方法存在如下问题：

(1)提取TAM后需要短暂的体外培养，各种刺激因子可能改变TAM本身的状态，不能代表实时巨噬细胞的功能。

(2)PKH67染料稳定性差，荧光激发的条件下会随时间衰减。

(3)操作复杂，成本较高。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供一种GFP转染肿瘤细胞的方法在检测肿瘤相关巨噬细胞吞噬功能中的应用。本发明利用绿色荧光蛋白(GFP)稳定转染肿瘤细胞，然后筛选高表达GFP的肿瘤细胞进行荷瘤实验，实验结束后提取的TAM无需体外刺激培养，可直接上机检测吞噬功能，为探究肿瘤相关巨噬细胞的免疫抑制机制提供了一种新的解决方案。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种GFP转染肿瘤细胞的方法在检测肿瘤相关巨噬细胞吞噬功能中的应用；

所述应用包括但不限于：

(1)体外筛选药物制剂；

(2)体外筛选吞噬细胞。