[发明专利]一种锆离子介导的纳米传感器及制备方法和应用

权利要求书

1.一种QD-捕获探针纳米结构，其特征是，所述纳米结构包括单量子点QD和捕获探针，链霉亲和素修饰在单量子点QD表面，磷酸基团和生物素各修饰在捕获探针的两端；所述捕获探针利用生物素-链霉亲和素自组装到单量子点QD表面。

2.如权利要求1所述的一种QD-捕获探针纳米结构，其特征是，经过修饰的捕获探针为5’P-TTT TTT TTT T-biotin。

3.一种PKA和/或PNK检测用试剂盒，其特征是，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的一种QD-捕获探针纳米结构和锆离子Zr⁴⁺。

4.如权利要求3所述的一种PKA和/或PNK检测用试剂盒，其特征是，还包括Cy5修饰的探针；进一步地，所述探针包括多肽探针和/或DNA探针；或，所述试剂盒还包括腺苷5′-三磷酸和PKA和/或PNK反应缓冲液。

5.一种锆离子介导的纳米传感器，其特征是，所述纳米传感器由内而外依次为权利要求1所述的一种QD-捕获探针纳米结构、锆离子Zr⁴⁺和Cy5修饰的探针，构建QD-Zr⁴⁺-Cy5纳米结构。

6.如权利要求5所述的一种锆离子介导的纳米传感器，其特征是，所述探针包括多肽探针和/或DNA探针。

7.如权利要求6所述的一种锆离子介导的纳米传感器，其特征是，所述多肽探针为含有PKA识别位点的多肽探针，在探针的羧基端标记了Cy5荧光基团；进一步地，所述多肽探针的序列为Cy5-(COOH)-KLRRASL-(NH₂)；进一步地，所述识别位点为丝氨酸；或，所述DNA探针的序列为5’-GTT GAG C-Cy5-3’。

8.一种锆离子介导的纳米传感器的制备方法，其特征是，所述制备方法包括QD-捕获探针纳米结构的制备和QD-Zr⁴⁺-Cy5纳米结构的制备；进一步地，所述QD-捕获探针纳米结构的制备方法包括将捕获探针、单量子点QD和10×QD缓冲液混合后避光孵育；进一步地，所述孵育时间为10-30min，优选的，为20min；

或，所述QD-Zr⁴⁺-Cy5纳米结构的制备包括：将探针、ATP、PKA和/或PNK反应缓冲液、PKA和/或PNK反应溶液混合后，在30-45℃下反应1-4h，然后，在55-75℃下孵育。

9.一种PKA和/或PNK抑制剂的筛选方法，其特征是，所述方法包括将模型抑制剂和权利要求5-7任一项所述的一种锆离子介导的纳米传感器共同反应；进一步地，所述模型抑制剂为H-89模型抑制剂和/或二磷酸腺苷和硫酸铵。

10.权利要求1或2所述的一种QD-捕获探针纳米结构和/或权利要求3或4所述的一种PKA和/或PNK检测用试剂盒和/或权利要求5-7任一项所述的一种锆离子介导的纳米传感器和/或权利要求8所述的一种锆离子介导的纳米传感器的制备方法在PKA和/或PNK活性检测中的应用。