[发明专利]一种用于快速鉴别比较农田黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度的方法

说明书

本发明提供快速鉴别比较农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度的方法。步骤：(1)用察氏培养基或其他适宜产毒黄曲霉菌生长的培养基培养待测土壤样品培养待测土壤样品并制备待鉴别土壤样品的待测液，备用；(2)采用间接非竞争双抗体夹心法鉴别比较农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度；(3)通过比较AFT‑YJFZ01浓度，得知农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度；所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子是指AFT‑YJFZ01肽，其氨基酸序列见SEQ ID NO.1所示。其用于鉴别农田土壤样品中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度，鉴别速度快，及时性和实用性强，容易推广应用。

技术领域

本发明涉及一种用于快速鉴别比较农田黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度的方法。

背景技术

黄曲霉毒素毒性强、危害大，是污染食品种类最多的污染物，近年总体呈现污染加重趋势，严重威胁食品安全和人民健康。黄曲霉毒素是自然界毒性最强的一类真菌毒素，其中黄曲霉毒素B1是国际癌症研究组织(International Agency for Research on Cancer,IARC)认定的I类致癌物，已引发过多起人畜群体中毒事件，成为肝癌病例高发的主要原因之一。根据近5年Web of Science检索数据统计：黄曲霉毒素污染食品及原料种类超过了110种，高居污染物首位。

已有研究表明，黄曲霉毒素主要由黄曲霉等产毒真菌产生。以花生为例，花生在田间已经带上了黄曲霉毒素的产毒菌株，在收获后这些菌株伴随着花生一起进入包装袋、运输车、仓库、加工线等，条件一旦适宜，均可以产生大量的黄曲霉毒素，从而威胁花生及其制品的消费安全和人民生命健康安全。

为了减少花生产后尽量少带甚至不带黄曲霉毒素的产毒真菌，美国农业部农业研究局、联合国粮农组织(FAO)的国际半干旱研究所等国际知名研究机构将黄曲霉毒素的产毒真菌列为花生等作物的土传病原加以研究与防控。

然而，如何鉴别农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌丰度？这对制定防控策略的精准性和及时性都是至关重要的。现有报道的鉴别农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌丰度方法主要是菌落数计数法，即在固体察氏培养基或具有等同效应的平板培养基培养土壤样品，直至长出菌落，然后计算出每克土壤中的菌落数。该现有方法中，有时平板上长出的菌落数多到相互重叠或者少到寥寥无几，均会影响计算结果的准确性，尤其是需要对样品培养很多天才能长出菌落，难以满足即时性要求。

针对上述难题，发明人团队经过十多年攻关研究，成功发现了一种黄曲霉毒素的产毒菌产毒力指示分子，并首次研究发现：该指示分子在土壤培养6-24 小时即可以产生，尤其是该指示分子在土壤样品培养6-24小时后，其浓度与上述现有的菌落数计数法的结果呈现正相关关系，从而发明了快速鉴别比较农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度的方法及其应用，所发明的技术方案可用于田间黄曲霉毒素的产毒真菌发生风险监测，为及时防控与早防早控提供了科学依据。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足，提供一种用于快速鉴别比较农田黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度的方法，其用于鉴别农田土壤样品中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度，鉴别速度快，及时性和实用性强，容易推广应用。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：

快速鉴别比较农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度的方法，包括以下步骤：

(1)用察氏培养基或其他适宜产毒黄曲霉菌生长的培养基培养待测土壤样品，制备待鉴别土壤样品的待测液，备用；

(2)采用间接非竞争双抗体夹心法鉴别比较农田土壤中黄曲霉毒素的产毒真菌相对丰度，步骤包括：

a待测液加入到孔底包被有黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01 的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板孔中，反应，洗板；

b加入黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01多克隆抗体反应，洗板；