[发明专利]一种透明质酸检测试剂盒及其方法

说明书

本发明公开了一种检测透明质酸的试剂盒及其方法。本发明通过将HABP包被于胶乳微球上，并利用封闭剂对试剂盒进行封闭后，在一定波长下，用来检测血清中透明质酸的含量。实验结果表明，本发明所述的胶乳免疫比浊法制备的透明质酸检测试剂盒相对其他方法学的透明质酸检测试剂盒在准确度、精密度、线性、稳定性、灵敏度方面均较好，且该方法较其他方法安全性好，检测速速快，且易自动化，试用在产业上有效地推广应用。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂生化试剂技术领域，具体涉及一种透明质酸检测试剂盒及其方法。

背景技术

透明质酸(hyaluronic acid HA)是一种大分子的多糖，其主要合成场所是间质细胞，并通过淋巴循环进入人体血液中，后在肝脏中代谢，通过肾小球滤过后排出。一般正常人血清含HA的量小于100ng/ml。由于透明质酸是经过肝内皮细胞摄取降解，所以患有肝病的患者尤其是肝硬化的患者，由于肝内皮细胞受损，导致其对透明质酸的摄取和降解功能的下降，使得肝病患者血清中的透明质酸含量增加，所有通过检测血清中透明质酸的含量的变化可以做为早期诊断肝纤维化的指标。另外，患有类风湿性关节炎和硬皮病时，会增加血清中透明质酸的来源，而使其含量增加；或者肝肾疾病会影响人体内透明质酸的排出，而使其在血清中的含量增加。所以，通过检测血清中透明质酸含量的变化，可以反映肝脏病变及肝硬化程度。

目前血清中透明质酸的含量的检测方法主要有放射性免疫检测法、酶联免疫检测法 (ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)。放射性免疫检测法主要是在未知HA量的标本中加入一定量透明质酸结合蛋白(HABP)；再加入碘标记透明质酸，使其与标本反应所剩的HABP 结合；再用第一抗体即羊或者兔抗HABP血清、第二抗体即驴抗羊或羊抗兔血清，将HABP沉淀下去，测定其放射性，HABP所结合的碘标记的HA与标本中HA含量呈负相关，用HA标准品同步对比操作作出放射性浓度标准曲线，把测得的待测标本放射性相对值在标准曲线上查出对应浓度值。但该方法对设备和人员要求高，不利于应用推广。ELISA检测HA主要是以HABP (透明质酸结合蛋白)为抗体、双夹心法为基础，与放免法比较，灵敏度相近，但检测血清 HA值却明显低于放免法。化学发光免疫分析法检测血清中的透明质酸，主要基于竞争和夹心两种技术，竞争法的原理是将样本中的HA通过与固相载体上的包被HA与稀释液中的HABP结合实现检测，样本HA浓度越高，发光值越低；夹心法检测通过形成固相包被HABP-HA-HABP”夹心复合物”实现检测，发光值与样本HA浓度成正比。但该方法与酶免和放免检测的正常人血清中HA的含量差异很大，分析可能原因是HA本身是一类分子量大小不均匀的多糖分子，其分子量的范围从105-107，双抗体夹心法需要有20个以上的糖基与蛋白结合才能够检测出来，而放免和酶免不需要HA有20个以上的糖基，所以其检测的范围较双抗体夹心法广泛。而酶免和放免检测透明质酸均有其不足之处。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测血清样本中透明质酸含量的操作简便、成本低、可自动化、准确度高的方法，使其能够在临床上得到广泛应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种透明质酸检测试剂盒，该试剂盒包含试剂R1、R2和校准品；其中试剂R1中包含缓冲液、氯化钠、防腐剂以及稳定剂。所述试剂R2包含活化缓冲液、包被缓冲液、封闭液、贮存缓冲液，以及胶乳微球和HABP，以及偶联剂。

本发明的检测原理如下：将透明质酸结合蛋白(HABP)通过偶联剂包被至胶乳微球上，样本中的HA与微球上的HABP特异性结合后，通过在一定波长下测定吸光度的变化，此种变化与样本中的HA含量成比例，从而定量测定出血清样本中HA的含量。