[发明专利]一种核黄素的发酵方法及所用发酵培养基

权利要求书

1.一种核黄素的发酵方法,其特征在于，包括以下步骤：

S1、种子活化：将甘油管保存的枯草芽孢杆菌自然解冻，挑取0.5-1.0mL枯草芽孢杆菌菌落接至装有活化培养基的三角瓶中,于培养箱中200-300r/min，37℃培养20-24h，得到活化种子；

所述枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CICC 20872，保藏日期2007年2月9日；

S2、种子培养：吸取S1中得到的活化种子按体积比计算，即活化种子：种子培养基的体积比为5-10：100，将活化种子接种于培养罐中的种子培养基，然后通过控制通气量在1V/V.M，溶氧量DO为20-40％，37℃进行培养20-24h，得到种子液；

S3、发酵培养基配制：

所述发酵培养基，按重量百分比计算，其原料组成及含量如下：

蔗糖3-5％

酵母浸粉0.5-1.5％

豆粕粉0.5-0.8％

玉米蛋白粉0.5-0.8％

棉籽饼粉0.3-0.4％

甜菜碱0.15-0.30％

氯化钠0.20-0.30％

碳酸钙0.15-0.40％

余量为水；

将所述发酵培养基各原料组分混合完成后，加入发酵罐内，控制发酵罐的装液量按体积比计算，即发酵培养基：发酵罐的体积比为50-60：100；

S4、酶解处理：室温条件下，向发酵罐中加入酶，并对发酵培养基进行酶解处理10-30min，得到酶解后的发酵培养基；

所述酶为纤维素酶、蛋白酶和脂肪酶中的一种或两种及以上，酶的添加量按发酵培养基中的氮源计算，酶10-30U/克氮源，其中所述的氮源为豆粕粉、玉米蛋白粉、棉籽饼粉；

S5、灭菌处理：控制温度120-125℃对酶解后的发酵培养基进行灭菌处理30-45min，得到培养液；

S6、发酵培养：将发酵罐内的培养液降温至37℃后，将培养好的种子液按体积比计算，即种子液：培养液的体积比为5-10：100的比例，将种子液接种于发酵罐的培养液中控制通气量在1V/V.M，溶氧量为20-40％，pH为6.8-7.2，进行发酵72h，得到发酵液；

上述发酵过程中通过补料控制发酵罐中的培养液的还原糖浓度维持在1.0％以下，所述补料采用的补料培养基为质量百分比浓度为40-60％的葡萄糖水溶液。

2.根据权利要求1所述的核黄素的发酵方法，S3中所述发酵培养基中按重量百分比计算，还包括0.10-0.30％的发酵液残渣；

所述发酵液残渣是对权利要求1所述的发酵方法最终得到的发酵液提取核黄素后剩余的残液采用电渗析除去盐分后，用双锥卧螺离心机在4000-5000r/min下离心30-60min，再经过滤、控制温度为200-350℃烘干得到的残渣。

3.根据权利要求1所述的核黄素的发酵方法，S4中所述酶的酶解温度为25-55℃。

4.根据权利要求2所述的核黄素的发酵方法，S4中所述酶由纤维素酶、脂肪酶或蛋白酶中任意两种按质量比1：1组成。

5.根据权利要求4所述的核黄素的发酵方法，S4中所述酶为纤维素酶和脂肪酶或纤维素酶和蛋白酶的组合，酶解处理时，先控制发酵培养基的温度为45-55℃、pH为4.5-5.5，向发酵培养基中加入纤维素酶进行酶解处理8-12min后，再加入脂肪酶或蛋白酶；

当加入蛋白酶时，上述纤维素酶进行酶解处理结束后，先控制发酵培养基的温度为35-45℃、pH为5.5-6.5，再向发酵培养基中加入蛋白酶进行酶解处理18-22min；

当加入脂肪酶时，上述纤维素酶进行酶解处理结束后，先控制发酵培养基的温度为25-35℃、pH为6.5-7.5，再向发酵培养基中加入脂肪酶进行酶解处理18-22min。