[发明专利]一种oligos标记抗体的方法及其标记得到的抗体

说明书

本发明公开了一种oligos标记抗体的方法及其标记得到的抗体，采用生物素化的oligos，连接链霉亲和素，再通过链霉亲和素连接生物素化的抗体，形成oligos‑生物素‑链霉亲和素‑生物素‑抗体复合物。不同的oligos标记物，形成多种标记复合物，可以同时对多种抗体进行标记。通过本发明方法得到的oligos抗体复合物，抗体和oligos分子比例固定，可以用于双抗体夹心法等相应的实验。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种oligos标记抗体的方法其标记得到的抗体。

背景技术

目前酶联免疫反应(ELISA)采用HRP标记抗体，虽然检测灵敏度较高，但HRP催化TMB底物反应时，反应容易达到饱和，使得高值无法继续上去，线性范围较窄，同时，当对同一份样本进行多种蛋白同时检测时，需要大量的前处理，存在操作步骤多，耗费试剂量大，需要多次清洗，检测通量低等缺点。胶体金免疫试纸条，采用纳米金颗粒标记抗体，技术虽然简便易行，适合于现场快速检测，但是由于只能进行半定量分析、检测结果的稳定性较差而且检测限较低，因此该检测方法不宜定量较低浓度的蛋白。胶乳免疫比浊法，采用胶乳颗粒标记抗体，虽然能进行定量检测，但检测灵敏度依然不够，限制了应用。

发明内容

为解决目前蛋白的快速实时检测中ELISA等检测方法复杂耗时费试剂低通量的缺点、胶体金无法定量检测的缺点，胶乳比浊灵敏度低等缺点，本发明提出了一种oligos标记抗体的方法， 该方法在检测过程中具有高通量、特异性高、通用性强、节省时间，样本和试剂等优势。

一种oligos标记抗体的方法，包括以下步骤：获取生物素-oligos复合物和生物素-抗体复合物；使用链霉亲和素将所述生物素-oligos复合物和所述生物素-抗体复合物交联得到oligos-生物素-链霉亲和素-生物素-抗体复合物。

进一步地，所述生物素-oligos复合物和所述链霉亲和素的摩尔比为（1-4）：1。

进一步地，所述生物素-oligos复合物或所述生物素-抗体复合物的制备包括：对生物素进行活化，得到活化的生物素；将所述活化的生物素与抗体或oligos混合，室温旋转反应，得到所述生物素-抗体复合物或所述生物素-oligos复合物。

更进一步地，在制备得到的所述生物素-oligos复合物这一产物中的oligos与生物素的摩尔比为1:1-1:10。

更进一步地，所述生物素-抗体复合物的制备中，采用的交联剂为EDC和NHS的组合，或者为EDC和Sulfo-NHS的组合。

进一步地，所述oligos的5’端或3’端修饰有氨基。

进一步地，使用交联剂将所述活化的生物素连接在所述氨基上。

进一步地，所述交联剂包括β-氰乙基亚磷酰胺、四氮唑或核苷亚磷酰胺。

进一步地，所述oligos的碱基片段长度为2-100bp。

进一步地，所述oligos与所述活化的生物素混合的摩尔比为1:1-1:20。

进一步地，所述对生物素进行活化，包括以下步骤：将生物素与EDC和NHS混合，室温旋转反应15-25分钟，得到活化的生物素；其中，生物素与EDC摩尔比为10：1，生物素与NHS摩尔比为10：1。

另一方面，本发明还提供一种oligos标记的抗体，所述oligos标记的抗体是由上述任一项所述的方法标记得到的oligos-生物素-链霉亲和素-生物素-抗体复合物。

进一步地，所述oligos-生物素-链霉亲和素-生物素-抗体复合物中，抗体与oligos的摩尔比为（0.3-1）：1。