[发明专利]一种无菌菠萝外植体制备方法及其农杆菌转化方法

权利要求书

1.一种无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，包括：将菠萝植株消毒后切块，并放在菠萝不定芽诱导培养基上进行不定芽的诱导，得到的不定芽继续培养成无菌菠萝植株，从无菌菠萝植株基部切下茎圆片，作为无菌菠萝外植体。

2.根据权利要求1所述的无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，所述菠萝植株为幼嫩的菠萝植株；将其冲洗干净后在无菌环境中对其进行消毒处理。

3.根据权利要求2所述的无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，所述菠萝植株的消毒处理步骤包括：先用75％的酒精消毒30秒，无菌水清洗3～5次，再用0.1％的HgCl₂消毒6-8min，无菌水清洗5次以上，每次清洗时间大于1min。

4.根据权利要求1所述的无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，经消毒处理后的菠萝植株用无菌滤纸吸干水分，并将消毒好的菠萝植株切成0.4～0.8cm的块状，放置在菠萝不定芽诱导培养基3B0.2N上，26℃温度条件下，光照培养20～30天，获得菠萝不定芽。

5.根据权利要求1所述的无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，将得到的不定芽转移至MS液体培养基上，26℃温度条件下，光照继续培养20～30天，获得无菌菠萝幼株；将菠萝幼株继续转移至液体PM培养基上，26℃温度条件下，光照继续培养14天，获得无菌菠萝植株。

6.根据权利要求1所述的无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，将得到的无菌菠萝植株，在超净台中从基部开始横切2-4mm厚度的茎圆片2-3片，作为无菌菠萝外植体。

7.根据权利要求4所述的无菌菠萝外植体的制备方法，其特征在于，所述菠萝不定芽诱导培养基3B0.2N包括如下质量浓度的组分：

MS 4.43g/L，蔗糖30g/L，植物凝胶3g/L，6-BA 3mg/L，NAA 0.2mg/L；

其pH为5.6-5.8。

8.根据权利要求5所述的无菌菠萝外植体的获得方法，其特征在于，液体培养基MS包括如下质量浓度的组分：

MS 4.43g/L，蔗糖30g/L，植物凝胶3g/L；

其pH为5.6-5.8；

液体PM培养基包括如下质量浓度的组分：

MS 4.43g/L，蔗糖30g/L，6-BA 2mg/L；

其pH为5.6-5.8。