[发明专利]一种桔梗中磷脂类成分定性分析及其C=C定位的方法

权利要求书

1.一种通过对磷脂类成分定性分析及其C＝C定位控制桔梗质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1、采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂类成分作为分析样品，其中，所述Matyash方法提取桔梗中的磷脂类成分包括步骤：取桔梗供试品粉末50mg，加入0.3mL甲醇和1mLMTBE，超声提取10min，加入0.25mL水诱导相分离，在14000rpm下离心10min后，收集上部有机层，剩余残渣重复提取一遍，合并有机相得到所述分析样品；

步骤S2、第一次进样所述分析样品，经超高效液相色谱-高分辨质谱后分离为磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱，同时得到ESI⁺MS^E及ESI^-MS^E数据，推测出其分子式，

其中，所述高分辨质谱条件如下：

离子源：电喷雾；

毛细管电压：2.0kV；

锥孔电压：40V；

源温度：120℃；

雾化气温度：450℃；

雾化气流速：800L/h；

锥孔气流速：50L/h；

步骤S3、根据ESI^-MS^E数据得到的母离子信息，第二次进样所述分析样品，采用ESI^-MS/MS模式，碰撞能分别设定为：磷脂酰乙醇胺35eV，溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰胆碱30eV，磷脂酰胆碱38eV，采集ESI^-MS/MS数据，判断磷脂上的脂肪酰基链组成；

步骤S4、开启串联在所述超高效液相色谱和高分辨质谱之间的PB光化学微型反应器，根据ESI⁺MS^E数据获得的母离子信息，第三次进样所述分析样品，采用ESI⁺MS/MS模式，碰撞能分别设定为：磷脂酰乙醇胺35eV，溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰胆碱30eV，磷脂酰胆碱38eV，所述分析样品与所述光化学微型反应器中的流动相中的丙酮进行PB反应，采集[M+58]⁺的ESI⁺MS/MS数据；根据[M+58]⁺的ESI⁺MS^E获得△26Da的诊断离子对，获得所述磷脂类成分的脂肪酰基链上C＝C的数量和位置如表4所示；

表4

所述超高效液相色谱条件如下：

色谱柱：ACQUITYBEH HILIC column 2.1mm×100mm,1.7μm；

流动相A为：10mmol/L乙酸铵水溶液；

流动相B为：50/50丙酮/乙腈(v/v)；

柱温：30℃；

流速：0.4ml/min；

进样量：2μL；

洗脱方式：梯度洗脱；

所述梯度洗脱程序如下：

2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，从ESI⁺MS^E数据及ESI^-MS^E数据获得母离子信息、磷脂分子的特征碎片、中性丢失片段和加和离子的精确分子量中的一种或几种。

3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤S2中，采用ESI⁺MS^E模式，低碰撞能量为6eV，高碰撞能量ramp为15-40eV。

4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述PB光化学微型反应器中紫外光的波长为190～260nm。