[发明专利]一种桔梗中磷脂类成分定性分析及其C=C定位的方法

说明书

本发明公开了一种桔梗中磷脂类成分定性分析及其C＝C定位的方法，采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂类成分，HILIC柱进行色谱分离，并以超高效液相色谱‑高分辨质谱系统串联在线PB光化学反应器组成磷脂定性及C＝C定位系统，通过三步实验对桔梗样品中磷脂类成分进行精准分析。本发明在桔梗样品中共分析鉴定出包括C＝C异体在内的180个磷脂分子，可为桔梗的物质基础研究及全面质量控制拓宽思路并提供技术支撑。

技术领域

本发明属于中药分析检测领域，具体涉及桔梗中磷脂类成分定性分析及其C＝C定位的方法。

背景技术

桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根，具有宣肺、利咽、祛痰、排脓等功效。桔梗既是常用的大宗药材，又是许多亚洲国家药食两用的功能性食品，伴随着市场需求量的增大，不同来源的桔梗品质参差不齐，对其质量控制的研究尤为必要。

桔梗主要含有三萜皂苷类、黄酮类、酚酸类、聚炔类、多糖类等成分，其中皂苷类化合物被认为是其主要药效成分。目前完善的桔梗质量评价体系仍然缺失，例如2020年版《中国药典》仅对桔梗皂苷D有明确的含量控制要求，监测目标单一。单纯依赖通行的质量检测方法检测个别化学成分的含量变化不足以表明桔梗药材质量的真正变化。因此，完善桔梗的物质基础和化学表征研究将有助于整体和系统地提高桔梗质量的可控性，并对科学标准的制定有着指导意义。

目前已有文献对桔梗的物质基础进行了研究，但是，对于桔梗中化学成分的表征还不够全面，例如，一些微量成分可能未完全暴露，且质谱图中的一些高丰度成分仍未被鉴定等。我们通过UPLC/IM-QTOF-MS技术对桔梗进行全成分分析过程中，首次发现了磷脂类化合物，且其在质谱图中具有非常高的丰度。研究表明，磷脂作为生物膜的主要成分具有广泛的生物活性。由于头部基团、骨架和脂肪酰基链的不同组合，以及C＝C和sn位置不同，磷脂在生物样本中具有复杂的分子结构，这使得磷脂的分离和鉴定仍面临诸多挑战。结构决定功能，特别是C＝C的引入对磷脂的结构和功能产生显著影响。而在以往研究中，针对于中药或食品中磷脂类化合物的鉴定多局限于头部基团和脂肪酸链的鉴定，而关于其不饱和脂肪酸链上的C＝C双键位置鉴定的研究较少。

因此，有必要对桔梗中磷脂类化合物进行研究，进一步阐明其精细结构，为全面提高桔梗的质量控制及药用和营养价值评价提供技术支撑。

发明内容

为了鉴定桔梗中的磷脂类成分，并对其不饱和脂肪酸链上的C＝C位置进行定位，本发明将采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂类成分，HILIC柱进行色谱分离，并以超高效液相色谱-高分辨质谱系统串联在线Paternò-Büchi(PB)光化学反应器(ΩAnalzer)组成磷脂定性及C＝C定位系统，通过三步实验对桔梗样品中磷脂类成分进行精准分析。

本发明提供一种桔梗中磷脂类成分定性分析及其C＝C定位的方法，包括以下步骤：

步骤S1、采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂类成分作为分析样品；

步骤S2、第一次进样所述分析样品，经超高效液相色谱-高分辨质谱后分离为磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱，同时得到ESI⁺MS^E及ESI^-MS^E数据，推测出其分子式；

步骤S2、根据ESI^-MS^E数据得到的母离子信息，第二次进样所述分析样品，采集ESI^-MS/MS数据，判断磷脂上的脂肪酰基链组成；