[发明专利]一种发热伴血小板减少综合征病毒感染IgM抗体检测用免疫荧光法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种发热伴血小板减少综合征病毒感染IgM抗体检测用免疫荧光法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)消化已培养好的感染发热伴血小板减少综合征病毒的细胞；

(2)完成步骤(1)中消化操作后，用含3％血清的DMEM液体吹散细胞；

(3)收集步骤(2)中完成吹散处理的细胞于ep管中进行离心，设置离心转速为300g，离心时间为15min，收集离心后的沉淀；

(4)用无菌PBS清洗步骤(3)中收集的沉淀2-3次；

(5)将步骤(4)清洗完成的沉淀在显微镜下边观察边用PBS调节细胞浓度至其可以在载玻片孔内铺成单层，即得细胞悬浮液；

(6)将步骤(5)中的细胞悬浮液滴加入12孔载玻片中，每孔滴加2μL细胞悬液铺孔爬片；

(7)待步骤(6)中孔内细胞悬浮液挥发后，用冷丙酮(-20℃-4℃)固定5-10min，晾干冻存玻片备用；

(8)将需要检测的患者血清用PBS于无菌状态下以1:80的比例进行稀释；

(9)将步骤(8)中稀释好的血清加入抗原片孔中，每孔20μL，每片抗原片设置一孔加20μL PBS做空白对照，同时设置阳性对照和阴性对照；

(10)将步骤(9)中的抗原片放入湿盒，置于37℃温箱内孵育45min；

(11)完成步骤(10)中的孵育反应后，将抗原片置于玻片染色缸中，加入PBS浸润抗原片，将玻片染色缸置于微量振荡器上震荡5min，重复3次，以清洗抗原片，清洗完成后室温吹干；

(12)以步骤(8)中相同的比例将二抗进行稀释，然后加入到经步骤(11)处理后的抗原片孔中，同样放置在湿盒中，然后置于37℃温箱孵育45min；

(13)完成步骤(12)中的孵育反应后，将抗原片置于玻片染色缸中，加入PBS浸润抗原片，将玻片染色缸置于微量振荡器上震荡5min，重复3次，以清洗抗原片，清洗完成后室温吹干；

(14)滴加甘油封片剂于步骤(13)清洗吹干后的抗原片上，盖上盖玻片封片，避光保存，荧光显微镜下观察，即可进行患者检测。

2.根据权利要求1所述的一种发热伴血小板减少综合征病毒感染IgM抗体检测用免疫荧光法，其特征在于，所述步骤(1)具体操作如下：将发热伴血小板减少综合征病毒感染Vero细胞，培养5-7天，待超过60％的细胞出现细胞病变效应后，收集细胞培养物上清液，并用0.25％的胰蛋白酶消化细胞。

3.根据权利要求1所述的一种发热伴血小板减少综合征病毒感染IgM抗体检测用免疫荧光法，其特征在于，所述步骤(9)中的阳性对照为已经确诊发热伴血小板减少综合征患者血清滴加的孔；阴性对照为滴加正常人血清的孔。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种发热伴血小板减少综合征病毒感染IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，包括：细胞悬浮液、患者血清和二抗；所述试剂盒由12个孔组成，每孔滴加2μL细胞悬液铺孔爬片，待孔内细胞悬浮液挥发后，用冷丙酮固定；将患者血清用PBS稀释后加入抗原片孔中，每孔20μL，每片抗原片设置一孔加20μL PBS做空白对照，同时设置阳性对照和阴性对照；将抗原片放入湿盒孵育；完成孵育，清洗、吹干；将二抗稀释后加入抗原片孔中，同样放置在湿盒中孵育；完成孵育，清洗、吹干，滴加甘油封片剂盖上盖玻片封片，即得检测试剂盒。