[发明专利]一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法

说明书

本发明提供一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，涉及属于生物技术领域。该一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，以膜荚黄芪种子为原料，包括以下步骤：S1、预处理：先将原料用25‑35℃的清水进行冲洗，然后将种子去壳、碾碎，浸泡在40‑55摄氏度的温水中1.5‑3天，然后将其搅拌成浆液；S2、提取：通过40um微孔滤膜进行过滤水分，然后向浆液中加入浆液体积2％‑5％琼脂粉、并与浆液搅拌均匀，然后置于离心机中进行离心，收集上清液，再放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品。通过在提取前进行预处理，制成充分均匀的浆液，然后进行提取和纯化，还加入琼脂粉，会使部分蛋白与其结合，保留住大部分的凝集素蛋白。

技术领域

本发明涉及属于生物技术领域，具体为一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法。

背景技术

膜荚黄芪是一种中药，具有补气升阳，益卫固表，利水消肿，托疮生肌等作用，药用价值极高，在我国有大面积的种植和培养。凝集素具有多种生物学功能，其潜在的研究价值逐渐被挖掘。凝集素是一类非免疫性的蛋白或糖蛋白，能可逆地、特异地与碳水化合物相互作用，具有多变的氨基酸序列，广泛的分布于微生物、病毒及植物中。凝集素有多种功能、结构、组织定位及糖结合特异性。

目前利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法提取出来的凝集素蛋白的提取率比较低，较多的蛋白质被损失掉，造成很大的浪费。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，解决了现有的提取方法膜荚黄芪种子的提取率低的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，以膜荚黄芪种子为原料，包括以下步骤：

S1、预处理：

先将原料用25-35℃的清水进行冲洗，冲洗时间为12-25分钟，然后将种子去壳、碾碎，浸泡在40-55摄氏度的温水中1.5-3天，然后将其搅拌成浆液；

S2、提取：

通过40um微孔滤膜进行过滤水分，然后向浆液中加入浆液体积2％-5％琼脂粉、并与浆液搅拌均匀，然后置于离心机中进行，18000r/min、离心20min，收集上清液，再加入20mmol/L、pH7.0的PBS缓冲液30ml进行溶解，放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品；

S3、纯化：

将得到的初产品分离纯化，用18mmol/l、pH7.0Tris-HCl缓冲液洗脱，调节流速在0.8ml/min，收集各个洗脱峰；经SUPERDEX-G25分子筛层析后，得到一个主要的蛋白峰，即为膜荚黄芪凝集素蛋白AML；

S4、检测：

对纯化后的产品进行蛋白质含量检测为75％-83％。

优选的，所述S1中浸泡时温水与原料的体积比为1.2-1.5：1，所述浸泡过程中对水温进行恒温加热。

优选的，所述S1中的搅拌包括机械搅拌和超声波搅拌，先进行机械搅拌10-15min，然后进行超声波搅拌10-25min，使其完全成为浆液。

优选的，所述对初产品进行蛋白质含量检测为45％-62％。

优选的，所述预处理、提取、纯化得到的产品均在-15℃至-18℃的冷冻箱内部保存。

优选的，所述S1中浸泡时加入温水体积1％-5％的精盐。

优选的，所述对纯化后的产品进行含糖量检测为16％-25％。