[发明专利]一种高效表达不同来源肌红蛋白/血红蛋白毕赤酵母重组菌株的构建

权利要求书

1. 一种重组菌，其特征在于，利用毕赤酵母异源表达1~2个拷贝数的肌红蛋白；所述肌红蛋白来源于猪，基因序列如Gene ID:397467所示；所述毕赤酵母为毕赤酵母X33；所述肌红蛋白以pPICZαA为表达载体。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌还包括如（a）、（b）所述的一种或多种特征：

（a）将所述肌红蛋白与促溶标签MBP、TrxA或NusA连接；

（b）敲除毕赤酵母基因组中ku70基因及蛋白酶基因pep4、yps1-1中的一个或两个。

3.一种胞外表达肌红蛋白的方法，其特征在于，利用权利要求1或2所述重组菌发酵生产肌红蛋白。

4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，将所述重组菌接种至YPD培养基中培养至OD₆₀₀=2~6，收集细胞，将细胞加入含终浓度为10~50 mg/L血红素的发酵体系，在25~35℃、100~600 rpm下发酵24~120 h；所述发酵体系中含有发酵培养基，发酵培养基包括但不限于YNB、YPD、BMM或BMMY培养基。

5.提升肌红蛋白表达量的方法，其特征在于，利用权利要求1所述重组菌表达单拷贝的肌红蛋白基因。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用促溶标签MBP、TrxA或NusA融合表达目的蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，敲除毕赤酵母X33基因组中ku70基因及蛋白酶基因pep4、yps1-1中的一种或两种。

8.权利要求1所述重组菌在制备肌红蛋白或其衍生物中的应用。

9.权利要求2所述重组菌在制备肌红蛋白或其衍生物中的应用。