[发明专利]检测卡尔曼综合征(KS)相关基因全外显子的引物和方法

说明书

本发明公开了检测卡尔曼综合征(KS)相关基因全外显子测序的方法、引物和试剂盒，包括扩增KAL1、FGFR1、PROKR2、PROK2、CHD7和FGF8全外显子的检测；将待测的正反向引物包被于96孔板微孔中，常温或4℃保存；检测时只需将混有待测样本基因组DNA的PCR反应液加入96孔板中，即可快速进行PCR扩增；之后经Sanger测序技术获得基因外显子序列。利用本发明的方法、引物和试剂盒进行检测具有易于保存、简便快速、准确度高等优点，对卡尔曼综合征的早期诊断和早期干预有辅助作用。

技术领域

本发明属于分子诊断检测领域，特别涉及卡尔曼综合征(KS)相关基因的检测。

背景技术

卡尔曼综合征(Kallmann Syndrome,KS)是伴有嗅觉缺失或减退的低促性腺激素型性腺功能减退症。是一种具有临床及遗传异质性的疾病。KS可呈家族性或散发性，其遗传方式有三种：X连锁隐性遗传，常染色体显性遗传，常染色体隐性遗传。

KS发病机制尚不十分清楚。目前认为可能是起源于嗅基板的GnRH神经元因各种原因不能正常迁徙、定位于下丘脑而导致完全或部分丧失合成和分泌 GnRH的能力，引起下丘脑-垂体-性腺轴功能低下，不能启动青春期，而表现为青春期发育延迟。随着对KS遗传学研究的深入，陆续发现一些和KS发病相关的基因，如KAL1基因、成纤维细胞生长因子受体1基因(FGFRI)、成纤维细胞生长因子8基因(FGF8)、前动力蛋白2基因受体(PROKR2)、前动力蛋白2基因(PROK2)，这些基因的功能可能和GnRH神经元的正常迁徙、嗅球的发育及 GnRH神经元轴突向正中隆起的投射过程密切相关。但是仅30％的Kallmann综合征发病与上述基因相关，提示还有其他KS的发病相关基因尚未发现。

发明内容

本发明的目的是提供一个检测卡尔曼综合征(KS)相关基因KAL1、FGFR1、 PROKR2、PROK2、CHD7和FGF8全外显子测序的引物。包括：扩增KAL1、 FGFR1、PROKR2、PROK2、CHD7和FGF8全外显子的引物，其碱基序列其碱基序列见表1。

进一步的，表1所述上游引物的5’端还包括M13-F序列，下游引物5’端还包括M13-R序列。

进一步的，还包括测序引物，其碱基序列为

M13-F:TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R:AACAGCTATGACCATG。

本发明还提供了检测卡尔曼综合征(KS)相关基因KAL1、FGFR1、PROKR2、 PROK2、CHD7和FGF8全外显子测序情况的方法，包括以下步骤：

(1)将上、下游引物包被于96孔板微孔中，常温或4℃保存备用；

(2)抽提待测样本的基因组DNA；

(3)配制含步骤(2)中抽提的基因组DNA的PCR反应液，加入96孔板中进行PCR扩增；

(4)对步骤(3)中的扩增产物进行测序；

(5)对测序结果进行判断，确定各基因的突变情况；

其中，步骤(1)PCR反应液中的扩增引物碱基序列见表1所述上游引物的 5’端还包括M13-F序列，下游引物5’端还包括M13-R序列。

进一步的，步骤(4)中测序引物碱基序列还包括测序引物，其碱基序列为

M13-F:TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R:AACAGCTATGACCATG。

本发明还提供了一种检测卡尔曼综合征(KS)相关基因KAL1、FGFR1、 PROKR2、PROK2、CHD7和FGF8全外显子测序的试剂盒，包括