[发明专利]一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针组合、试剂盒及分型检测方法

权利要求书

1.一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针和阻遏序列的组合物，其特征在于：所述引物探针分别针对突变株上的S基因上的5个突变位点设计，所述阻遏序列分别针对突变株上的S基因的N501、69-70HV、E484、K417T和K417N的非突变位点设计，所述引物探针如下：

S基因上的N501Y突变位点的引物探针组:SEQ ID NO.1-3；

S基因上的69-70del突变位点引物探针组：SEQ ID NO.4-6；

S基因上的E484K突变位点引物探针组：SEQ ID NO.7-9；

S基因上的K417T突变位点引物探针组：SEQ ID NO.10-12；

S基因上的K417N突变位点引物探针组：SEQ ID NO.13-15；

所述阻遏序列3’端进行双脱氧处理，所述阻遏序列如：

针对 N501非突变位点设计的阻遏序列如SEQ ID NO.19所示；

针对69-70非突变位点设计的阻遏序列如SEQ ID NO.20所示；

针对E484非突变位点设计的阻遏序列如SEQ ID NO.21所示；

针对K417T非突变位点设计的阻遏序列如SEQ ID NO.22所示；

针对K417N非突变位点设计的阻遏序列如SEQ ID NO.23所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针和阻遏序列的组合物，其特征在于：所述突变株为B.1.1.7型、B.1.351型和P.1型。

3.根据权利要求1所述的一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针和阻遏序列的组合物，其特征在于：所述引物探针和阻遏序列的组合物还包括针对参比基因的引物探针，所述参比基因为N基因，所述N基因的引物探针组如SEQ ID NO.16-18所示。

4.包含权利要求1-3任一所述一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针和阻遏序列的组合物的试剂盒在非诊断目的的新型冠状病毒突变株检测中的应用。

5.一种用于新型冠状病毒突变株分型检测试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1-3任一所述的用于检测新型冠状病毒突变株检测的引物探针和阻遏序列的组合物、ARMS-荧光PCR酶系、ARMS-荧光PCR反应体系、阳性质控品和阴性质控品。

6.根据权利要求5所述的一种用于新型冠状病毒突变株分型检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中各引物探针组和阻遏序列的浓度分别为：

0.1-0.5μM的针对N501Y突变位点的上游引物、0.1-0.5μM的针对N501Y突变位点的下游引物、0.05-0.25μM的针对N501Y突变位点的探针和0.02-0.1μM的针对N501Y非突变位点设计的阻遏序列；

0.1-0.5μM的针对69-70del突变位点的上游引物、0.1-0.5μM的针对69-70del突变位点的下游引物、0.05-0.25μM的针对69-70del突变位点的引物探针和0.02-0.1μM的针对69-70del非突变位点设计的阻遏序列；

0.1-0.5μM的针对E484K突变位点的上游引物、0.1-0.5μM的针对E484K突变位点的下游引物、0.05-0.25μM的针对E484K突变位点的探针和0.02-0.1μM的针对E484K非突变位点设计的阻遏序列；

0.1-0.5μM的针对K417T突变位点的上游引物、0.1-0.5μM的针对K417T突变位点的下游引物、0.05-0.25μM的针对K417T突变位点的探针和0.02-0.1μM的针对K417T非突变位点设计的阻遏序列；

0.1-0.5μM的针对K417N突变位点的上游引物、0.1-0.5μM的针对K417N突变位点的下游引物、0.05-0.25μM的针对K417N突变位点的探针和0.02-0.1μM的针对K417N非突变位点设计的阻遏序列；

0.1-0.5μM的参比基因为N基因的上游引物、0.1-0.5μM的参比基因为N基因的下游引物、0.05-0.25μM的参比基因为N基因的探针。