[发明专利]检测黄颡鱼小RNA病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒

权利要求书

1.检测黄颡鱼小RNA病毒-1的引物探针混合物，其特征在于，其由引物组A和Taqman荧光探针B组成，Taqman荧光探针B的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的引物探针混合物，其特征在于，所述引物组A包含引物YCPRV-1-q85F和引物YCPRV-1-q85R；

所述的引物YCPRV-1-q85F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的引物YCPRV-1-q85R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述Taqman荧光探针B的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.根据权利要求1所述的黄颡鱼小RNA病毒-1Taqman荧光探针B，其特征在于，所述荧光报告基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5和花菁5.5中的一种或几种；所述荧光淬灭基团选自6-羧基四甲基罗丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬灭剂1、黑洞淬灭剂2或黑洞淬灭剂3中的一种或几种。

4.一种黄颡鱼小RNA病毒-1荧光定量检测试剂盒，其特征在于，包括特异性引物组A和Taqman荧光探针B。

5.根据权利要求4所述的检测黄颡鱼小RNA病毒-1荧光定量检测试剂盒，其特征在于，Taqman荧光探针B核苷酸序列5’端标记HEX，3’端标记BHQ1。

6.根据权利要求4所述的检测检测黄颡鱼小RNA病毒-1荧光定量检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括独立包装的病毒核酸提取液、一步法RT-qPCR反应液、阳性质控品、阴性质控品，其中病毒核酸提取液为含有4mol/L异硫氰酸胍、0.5％十二烷基肌氨酸钠、40mmol/L DTT、25mmol/L柠檬酸钠、20μg糖原、pH8.0的缓冲液，PCR反应液为探针法荧光定量PCR反应液，阴性质控品为灭菌生理盐水，阳性质控品为含有黄颡鱼小RNA病毒-1衣壳蛋白基因的载体。

7.一种由权利要求4所述的检测黄颡鱼小RNA病毒-1荧光定量检测试剂盒在检测黄颡鱼小RNA病毒-1中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

待检样品使用病毒核酸提取液提取病毒总RNA，采用一步法RT-qPCR试剂盒进行荧光定量RT-qPCR，反应条件为42℃20分钟，95℃条件下反应10分钟；然后95℃反应10秒，60℃反应32秒，共40个循环；荧光信号收集时设定为HEX，荧光信号收集设在60℃；

结果判断：如果检测通道没有出现S型扩增曲线，判为黄颡鱼小RNA病毒-1阴性；如果检测通道出现S型扩增曲线，Ct值≤35，则黄颡鱼小RNA病毒-1别判定为阳性。