[发明专利]检测黄颡鱼小RNA病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测黄颡鱼小RNA病毒‑1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒，其中，黄颡鱼小RNA病毒‑1荧光定量检测试剂盒包括特异性引物组A和Taqman荧光探针B；本发明采用荧光定量技术，通过检测黄颡鱼小RNA病毒‑1的衣壳蛋白基因，来检测黄颡鱼小RNA病毒‑1，这是目前国内外首次研制检测黄颡鱼小RNA病毒‑1的引物组和试剂盒。该试剂盒的研制为黄颡鱼小RNA病毒‑1病的监测和预防奠定基础。

技术领域

本发明属于靶RNA片断的快速检测领域，具体地说，涉及一种检测黄颡鱼小RNA病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒。

背景技术

黄颡鱼小RNA病毒-1(Yellow catfish Picornavirus，YCPRV-1)是黄颡鱼潜在的致病性病原。其对黄颡鱼具有一定的致病力，常引起黄颡鱼体表出血、肠炎，少数病鱼肝脏有出血点。其引起的疾病对黄颡鱼养殖产业危害较大。YCPRV-1为单链RNA病毒，属于小RNA病毒科，未确定属的分类地位，通过基因组比较发现，与该病毒基因组同源性最高的病毒为日本海鳗小RNA病毒(Conger japonicus Calicivirus)，同源性为38％，表明黄颡鱼小RNA病毒-1是一种全新的病毒，与已知小RNA病毒科中的其它任何病毒都不同。该病毒由发明人于2018年6月从黄颡鱼中分离所得，其基因组也由发明人首先获得，其基因组包含两个编码框，全长为7149bp。我国是黄颡鱼养殖大国，黄颡鱼病害发生率影响着广大鱼民的经济收入，近几年来，由于黄颡鱼病害的频发，已给广大养殖户造成了巨大的经济损失。黄颡鱼小RNA病毒-1在国内外未见报道，该病毒至今也未有检测试剂盒和检测方法报告，这严重阻碍了该病毒引起疾病的预警与预防工作，因此，对该病毒检测试剂盒的开发和检测技术的研究迫在眉睫。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述问题，提供了一种检测黄颡鱼小RNA病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒，本发明的引物、探针和试剂盒特异性强，敏感性高，能实现快速、有效且准确检测黄颡鱼小RNA病毒-1；本发明中的试剂盒为荧光定量检测试剂盒，该试剂盒在封闭的情况下判断结果，扩增产物不会对检测环境造成污染，可用于黄颡鱼小RNA病毒-1病的监测和早期预警与预防。本发明采用荧光定量技术，通过检测黄颡鱼小RNA病毒-1的衣壳蛋白基因，来检测黄颡鱼小RNA病毒-1，这是目前国内外首次研制的检测黄颡鱼小RNA病毒-1的试剂盒；该试剂盒的研制为黄颡鱼小RNA病毒-1病的监测和预防奠定基础。

为了解决上述技术问题，本发明还公开了一种检测黄颡鱼小RNA病毒-1的引物探针混合物，其由引物组A和Taqman荧光探针B组成，探针B的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

进一步地，引物组A包含引物YCPRV-1-q85F和引物YCPRV-1-q85R；

引物YCPRV-1-q85F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

引物YCPRV-1-q85R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

探针B的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

进一步地，荧光报告基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5和花菁5.5中的一种或几种；所述荧光淬灭基团选自6-羧基四甲基罗丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬灭剂1、黑洞淬灭剂2或黑洞淬灭剂3中的一种或几种。

本发明还公开了一种黄颡鱼小RNA病毒-1荧光定量检测试剂盒，包括特异性引物组A和Taqman荧光探针B。

进一步地，Taqman荧光探针B核苷酸序列5’端标记HEX，3’端标记BHQ1。