[发明专利]一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组、试剂盒及利用其测序的方法

说明书

本申请属于生物基因技术领域，尤其涉及一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组，所述引物组包括白纹伊蚊nad1基因的上游引物和下游引物，且所述上游引物Ab‑nad1‑F:5’‑TATCATAACNAAACCGAGGC‑3’；所述下游引物Ab‑nad1‑R:5’‑TTAGTAGTTTGTGTAATAGTAGGAGTAGC‑3’；其中，所述“N”表示选自A、T、G和C中的一个碱基，所述引物组能特异性地扩增白纹伊蚊nad1基因，利用该引物组和/含有该引物组的试剂盒对待测模板DNA扩增得到PCR扩增产物后进行下一步地检测和测序，能够快速、准确地识别白纹伊蚊，并精准地获得白纹伊蚊nad1基因序列，本方法简单易行且能够有效检测扩增效果,大大提高了分辨水平。

技术领域

本申请属于生物基因技术领域，尤其涉及一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组、试剂盒及利用其测序的方法。

背景技术

蚊虫，为一类专一吸血性节肢动物，作为目前已知的第一大传播媒介，能传播大量诸如细菌、真菌、病毒及原虫等病原微生物，具有重要的医学和公共卫生学意义。

白纹伊蚊(Aedes albopictus)，俗称亚洲虎蚊，其隶属于节肢动物门、昆虫纲、双翅目、蚊科、伊蚊属，为一种起源于东南亚、广泛分布于世界诸国，攻击性强且具有重要医学和公共卫生学意义的昆虫，其不仅通过叮咬向人和脊椎动物传播诸如登革热病毒(DengueVirus)、寨卡病毒(Zika Virus)、西尼罗病毒(West Nile Virus)及疟原虫(Plasmodium)等多种病原体，而这些病原体均能导致动物发病，甚至死亡，而且能直接导致人和动物的血液流失、皮肤发炎、继发感染及滋扰其正常工作和休息。因此，白纹伊蚊及其所携带的病原微生物对人及动物的健康形成一个潜在巨大的威胁，严重阻碍了世界医学、公共卫生事业及养殖业的发展。例如，美国因其每年损失高达1370亿美元，而印度、巴西及南非则分别高达1170亿美元，500亿美元，70亿美元。

白纹伊蚊主要形态特征：触须约为喙的1/5长，前胸前背片和后背片都具银白宽鳞，后背片上方并有褐色窄鳞。中胸盾片覆盖深褐色或深棕色细鳞和宽鳞，中央有一显著银白窄鳞纵条，从前端后伸而略为细削。足深褐色到黑色；各足股节有明显膝白斑；前跗节1-2有基白环或白斑；后跗节1-4有宽基白环，节5全白。形态极相似于埃及伊蚊，故非专业人士很难将它们区别开来。

种类鉴定是物种鉴别的前提和基础，同时也是有效监测、控制及防治虫媒病的关键环节之一。目前，人们经常采用最为直观、快速的传统形态学分类方法来鉴定及分类物种，但这一方法主要依据物种的形态特征，高度依赖样本的完整性和鉴定者的经验，故很难鉴别形态不完整或极为相似的物种，以及处于不同发育阶段的同一物种。白纹伊蚊为一种分布较为广泛的昆虫，其在长期的进化过程中肯定受到自然环境等因素的影响。为了快速适应环境，白纹伊蚊在形态及遗传结构会发生或多或少的变化，而这些变化很难直接被观察。因此，选择合适的基因标签在蚊虫的鉴定及分类等方面至为重要。

nad1基因为一线粒体基因，广泛存在于真核生物细胞中，因其具有进化速度快，缺乏基因重组及母系遗传等特征，在属间及种间存在多样性，故已广泛应用在种群结构、分子标记、生物进化、种系发生、物种鉴定及进化基因组学等方面研究。然而，目前鲜有学者利用nad1基因序列去研究双翅目昆虫的遗传多样性及其遗传进化关系。目前，尽管一些学者公布了双翅目昆虫线粒体基因组的通用引物，但利用这些通用引物不能特异地扩增白纹伊蚊nad1基因，故而无法进一步达到快速鉴定、分类的目的。

发明内容

本申请的目的在于提供一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组、试剂盒及利用其测序的方法，旨在一定程度上解决无法特异性地扩增白纹伊蚊nad1基因、快速鉴定白纹伊蚊种类的问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供了一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组，所述引物组包括白纹伊蚊nad1基因的上游引物和下游引物，且