[发明专利]一种热稳定性提高的蛋白酶K突变体有效
| 申请号： | 202110615088.8 | 申请日： | 2021-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN113215138B | 公开（公告）日： | 2022-11-22 |
| 发明（设计）人： | 杨广宇;王梁;徐灿;宫安;施婧妮 | 申请（专利权）人： | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/60 | 分类号： | C12N9/60;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;C12Q1/6806;C12R1/84 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 430223 湖北省武汉市东湖新技术开发区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 热稳定性 提高 蛋白酶 突变体 | ||
1.一种蛋白酶K突变体，包括：前导肽、成熟肽部分，其特征在于，所述突变体是在SEQID NO.2所示的氨基酸序列的基础上，将第94位苏氨酸突变为酪氨酸；
或者，将第94位苏氨酸突变为谷氨酸，
或者，将第94位苏氨酸突变为苯丙氨酸，
或者，将第94位苏氨酸突变为色氨酸，
或者，将第94位苏氨酸突变为酪氨酸、第151位酪氨酸突变为丙氨酸、第208位赖氨酸突变为组氨酸、第273位丝氨酸突变为苏氨酸、第293位甘氨酸突变为丙氨酸、第332位赖氨酸突变为精氨酸和第337位丝氨酸突变为天冬酰胺。
2.编码权利要求1所述蛋白酶K突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的核酸构建体。
4.一种重组毕赤酵母，其特征在于，以毕赤酵母为宿主，表达权利要求1所述的蛋白酶K突变体。
5.产生权利要求1所述蛋白酶K突变体的方法，其特征在于，将重组微生物细胞在适宜的条件下繁殖并使其表达编码蛋白酶K突变体的基因，从而从重组微生物细胞培养物中分离得到蛋白酶K突变体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将权利要求4所述的重组毕赤酵母在培养基中培养，用诱导剂诱导蛋白酶K的表达。
7.含有权利要求1所述的蛋白酶K突变体的组合物。
8.一种提高蛋白酶K热稳定性的方法，其特征在于，将第94位苏氨酸突变为酪氨酸；
或者，将第94位苏氨酸突变为谷氨酸，
或者，将第94位苏氨酸突变为苯丙氨酸，
或者，将第94位苏氨酸突变为色氨酸，
或者，将第94位苏氨酸突变为酪氨酸、第151位酪氨酸突变为丙氨酸、第208位赖氨酸突变为组氨酸、第273位丝氨酸突变为苏氨酸、第293位甘氨酸突变为丙氨酸、第332位赖氨酸突变为精氨酸和第337位丝氨酸突变为天冬酰胺。
9.权利要求1所述的蛋白酶K突变体在分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸C末端邻接的酯键和/或肽键中的应用，其特征在于，用于制备分子诊断试剂或用于分子诊断的核酸提取步骤。
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