[发明专利]禽流感和新城疫的血凝抑制试验检测方法

说明书

本发明涉及禽类疫病检测技术领域，尤其是一种禽流感和新城疫的血凝抑制试验检测方法。该种禽流感和新城疫的血凝抑制试验检测方法，经过大量试验证明修正后得到禽流感、新城疫血凝抑制试验抗体效价公式，设定11log₂为禽流感的参照血凝效价，设定12log₂为新城疫固定的参照血凝效价，直接进行血凝抑制试验并运用禽流感、新城疫血凝抑制试验抗体效价公式，求得HI抗体效价，其结果与正确抗体效价完全一致，具有实用性、准确性、普遍性，新检测方法既能节省试验时间，又能节省病毒抗原的使用量，大大提高了工作效率。

技术领域

本发明涉及禽类疫病检测技术领域，尤其是一种禽流感和新城疫的血凝抑制试验检测方法。

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的危及禽类、小型哺乳动物和人类的病毒性传染病，它是以呼吸道症状为主，至全身性败血症的疾病综合症，被国际兽医局(OIE)定为A类传染病。新城疫(Newcastle Disease)俗称“亚洲鸡瘟”，新城疫病毒(NewcastleDisease Virus，NDV)是引起鸡瘟病的重要病原体。新城疫与禽流感相似，是严重危害禽类的传染病，其发病率，感染率和死亡率都很高，也被OIE列为A类疫病。

目前对新城疫进行检测多采用GBT16550-2020新城疫诊断技术，对禽流感进行检测多采用GB-T18936-2020高致病性禽流感诊断技术。按照高致病性禽流感诊断技术(GB/T18936-2020)和新城疫诊断技术(GB/T 16550-2020)进行血凝抑制试验，检测出HI抗体效价的效率较慢，病毒抗原的使用量较大，诊断效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种禽流感和新城疫的血凝抑制试验检测方法，克服前述现有技术的不足，具有实用性、准确性、普遍性，既能节省试验时间，又能节省病毒抗原的使用量，大大提高了工作效率。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种禽流感和新城疫的血凝抑制试验检测方法，包括如下步骤：

(1)设定禽流感血凝抑制试验固定的参照血凝效价为11log2，设定新城疫血凝抑制试验固定的参照血凝效价为12log2；

(2)按照《禽流感、新城疫4HAU抗原配制表》配制禽流感参照血凝效价11log2或新城疫参照血凝效价12log2的4HAU抗原；

(3)取2个96孔V型微量反应板横向相邻放置，第2个96孔V型微量反应板作为第1个板的加长，用移液器在第1孔-第15孔各加入0.025mL PBS，第16孔加入0.05mL PBS；

(4)在第1孔加入0.025mL禽流感或新城疫标准阳性血清，充分混匀后移出0.025mL至第2孔，依次类推，倍比稀释至第14孔，第14孔弃去0.025mL，第15孔为阳性对照，第16孔为PBS对照；

(5)在第1孔—15孔各加入0.025mL 4HAU抗原，轻叩反应板，使反应物混合均匀，20℃-25℃室温下静置不少于30min，或在4℃环境下静置不少于60min；

(6)每孔加入0.025mL体积分数为1％的鸡红细胞悬液或0.75％鸡醛化红细胞悬液，轻晃混匀反应板后，20℃-25℃室温下静置35-45min，或在35-40℃恒温静置12-18min，当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果；

(7)结果判定，在PBS对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾斜，从背侧观察，1-3s内看红细胞是否呈泪珠状流下，只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差1个稀释度范围内，并且所用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果判定有效，记录试验抗体效价数值；