[发明专利]一种睡莲授粉后花粉管与胚珠的显微方法以及光学显微压片制作方法

权利要求书

1.一种睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片制作方法，其特征在于，由对授粉后的睡莲花雌蕊的采样、子房室分离、固定样本、软化组织、组织染色、组织压片、干燥七个步骤组成，各步骤具体操作如下：

(1)采样：摘下已经授粉的睡莲花花朵，剥离花瓣、花托，仅留下雌蕊；

(2)子房室分离：将子房室一一分离；

(3)固定样本：迅速将样本轻轻放入组织固定液中，杀死细胞，固定24小时以上；

(4)软化组织：在23-27℃条件下，将组织浸泡在4-6mol/LNaOH溶液中静置6-8小时；

(5)组织染色：将完成软化的待检样本置于盛有蒸馏水的培养皿清洗，随后，将样本置于乳酸酚棉蓝染色液中染色，静置8至12分钟；

(6)组织压片：采用“载玻片+材料+载玻片”的方式进行压片处理；

(7)干燥：将样本制片置于恒温电烘箱中，33-37℃干燥3至5小时，去除样本中的水分。

2.根据权利要求1所述的睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片制作方法，其特征在于，所述的雌蕊，包括雌蕊中的花粉管。

3.根据权利要求1所述的睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片制作方法，其特征在于，所述步骤(2)，将子房室一一分离的方法，具体是：每个子房室外侧上方有一个雌蕊附属物，沿着雌蕊附属物的边缘进行切片，将子房室一一分离。

4.根据权利要求1所述的睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片制作方法，其特征在于，所述步骤(3)，固定液的配比使用体积分数为80％乙醇、体积分数35％甲醛、体积分数35％冰醋酸混合而成，且体积比为10：1：1。

5.根据权利要求1所述的睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片制作方法，其特征在于，所述步骤(5)的清洗，具体是：轻轻摇晃培养皿，清洗30秒后更换蒸馏水，重复此操作3次。

6.根据权利要求1所述的睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片制作方法，其特征在于，所述步骤(6)的采用“载玻片+材料+载玻片”的方式进行压片处理，具体是：首先，将载玻片A的左右两端边缘处涂抹中性树胶；其次，将样本置于载玻片A的中心处，用另一规格相同的载玻片B轻轻盖在样本上；最后，固定好载玻片A的位置，轻撵载玻片B进行压片处理。

7.一种睡莲授粉后花粉管与胚珠的显微方法，其特征在于，按照权利要求1-6中任一项所述的光学显微压片制作方法制作得到睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片，然后在光学显微镜下观察，花粉管呈深蓝色。