[发明专利]一种添加微生物诱导子的ε-聚赖氨酸生物合成方法有效
申请号: | 202110618607.6 | 申请日: | 2021-06-03 |
公开(公告)号: | CN113234766B | 公开(公告)日: | 2022-04-05 |
发明(设计)人: | 曾昕;李峰;岳朝萍;曾化伟;信丙越;徐大勇;张标;李珊珊 | 申请(专利权)人: | 淮北师范大学 |
主分类号: | C12P13/02 | 分类号: | C12P13/02;C12N1/38;C12N1/20;C12N1/18;C12N1/14;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/865;C12R1/645;C12R1/465 |
代理公司: | 安徽省合肥新安专利代理有限责任公司 34101 | 代理人: | 乔恒婷 |
地址: | 235000 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 添加 微生物 诱导 赖氨酸 生物 合成 方法 | ||
1.一种添加微生物诱导子的ε-聚赖氨酸生物合成方法,其特征在于:
采用外源添加微生物诱导子的方式促进ε-PL的合成,包括如下步骤:
步骤1:发酵种子培养
将小白链霉菌接种于固体贝塔纳培养基上,于30℃恒温培养箱中培养10天,直至长出孢子;用接种环挑取2环孢子置于装液量80mL的500mL M3G培养基摇瓶中,于30℃恒温振荡培养箱中200rpm培养1天,获得可用于ε-PL发酵的成熟小白链霉菌种子液;
所述小白链霉菌购自中国工业微生物菌种保藏中,保藏编号CICC 11022;
步骤2:诱导微生物的培养、诱导子提取与保存
将灰葡萄孢菌接种于LB培养基或YPD培养基,在24℃、160rpm下培养5天,离心收集细胞;细胞用去离子水洗涤2遍后,加入75%乙醇进行搅拌研磨,研磨液4500rpm离心20min后取上层清液,旋转蒸发回收其中乙醇,并用丁醇进一步萃取,取有机相进行旋转蒸发,回收丁醇;蒸馏剩余液加水适当稀释即为微生物诱导子;诱导子溶液经过121℃、20min灭菌后,置于-20℃保存,有效期3天;
所述灰葡萄孢菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号CGMCC3.4584;
步骤3:添加微生物诱导子的ε-PL发酵
在ε-聚赖氨酸的生物发酵过程中添加微生物诱导子,以促进ε-PL的合成。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于
步骤3中,采用补料分批发酵的方法合成ε-聚赖氨酸,具体包括如下步骤:
将M3G液体培养基配好加入到5L发酵罐中,总装液量设置为3L,于115-121℃灭菌20-30min,结束冷却至室温后将以115-121℃单独灭菌20-30min的葡萄糖加入发酵罐;以8%的接种量接种小白链霉菌成熟发酵种子培养发酵,直至发酵液中葡萄糖消耗殆尽,发酵过程中添加微生物诱导子溶液;在碳源耗完后立即补充预灭菌的60%葡萄糖溶液,以控制碳源浓度在5-15g/L之间,并以预灭菌的600 g/L的硫酸铵溶液流加补充氨氮使其浓度位于0.5-1g/L之间。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:
步骤3中,培养发酵的条件为:初始pH值6.8、温度30℃、溶氧保持在30%以上。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:
微生物诱导子溶液的添加量为36g细胞湿重/L,于发酵24h时添加进发酵体系。
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